兔原代肋软骨细胞的三步酶消化法高效分离及体外培养观察 - 骨科.pdf

第 27卷第 16期 第 　三 　军 　医 　大 　学 　学 　报 Vol. 27 , No. 16 2005年 8月 　　ACTA 　ACAD EM IA E　M ED IC INA E　M IL ITAR IS　TER TIA E　　 A ug. 2005 1667 文章编号 :(2005)　 论著 兔原代肋软骨细胞的三步酶消化法高效分离及体外培养观察 ( ) 周 　强 ,李起鸿 ,许建中 ,石国华 　　 第三军医大学西南医院骨科 ,全军矫形外科中心 ,重庆 400038 　　提 　要 : 目的　观察三步酶消化法分离兔原代肋软骨细胞的效果和收获效率 ,并观察其体外传代培养的生物学特 性 。方法 　三步酶消化法设计为以培养液配制的 1 g/L 胰蛋白酶 / 1 g/L ED TA、1 g/L 透明质酸酶和 2 g/L Ⅰ型胶原酶顺序 消化肋软骨分离细胞 ,检测细胞收获效率和存活率 ;体外传代培养观察细胞形态 、生长及胞外基质中 Ⅰ型和 Ⅱ型胶原 、蛋 白多糖聚集体等的变化 。结果 　①肋软骨经三步酶消化软骨基质逐步解离和降解 ,细胞被完全分离 ,每克软骨的细胞收 4 获量平均为 4 2957 ×10 个细胞 ,细胞存活率平均为 972 % 。②原代和第 1代细胞附壁生长呈三角形或多角形 ,生长融合 ( 时呈卵圆形 , Ⅱ型胶原免疫组化和 甲苯胺蓝异染反应均呈阳性 ,原代细胞外基质有高的硫酸糖胺多糖含量为 806 1 ± ) μ 2 1140 g/ cm ;第 3代后细胞逐渐变为梭形 , Ⅱ型胶原免疫组化为阴性 , 甲苯胺蓝异染反应亦明显减弱 ,第 4 代细胞外基 ( ) μ 2 质的硫酸糖胺多糖含量为 4474 ±1018 g/ cm 。结论 　①三步酶消化法能完全消化降解肋软骨基质 ,使细胞完全分 离 ,并具有高细胞收获率和高细胞存活率 。②原代和第 1代肋软骨细胞具有良好的生物学活性 。 　　关键词 : 肋软骨 ;细胞分离 ;软骨细胞 ;组织工程 　　中图法分类号 : R329. 2　 文献标识码 : A Isola tion of chondrocy tes from rabb it r ib cartilage w ith threestep enzym a tic d iges tion and the ir b iolog ica l character istic in vitro ZHOU Q iang, L I Q ihong, XU J ianzhong, SH I Guohua (D ep artm ent of O rthop aedic s, Sou thwe st Ho sp ital, Th ird M ilitary M edi cal Un iversity, Chongqing 400038