生物技术制药重点简答总结.docVIP

生物技术制药概论 1、 生物技术制药过程包括哪些内容（P5） 第一阶段：实验室研究阶段，也称为发现或探索研究，属于应用基础研究阶段; 第二阶段：产品开发阶段，属于应用阶段，与第一阶段统称为研发阶段，即临床前研究; 第三阶段：商业化阶段，是将产品推向市场的过程。 2、详细说明下面专业英语的含义： Target identification and validation：靶基因的发现和证实 Assay development：建立检验方法 Proof of concept: 理论验证 High throughput: 高通量筛选 Lead generation: 先导化合物的发现 Lead optimization: 先导化合物的优化 System biology：系统生物学 Therapeutics: 治疗学 Commercialization : 商业化 First human dose：人类第一剂量 基因工程制药 3、有哪些方法合成第二链cDNA? 第一：自我引导合成法，（Self priming）：RNaseH 消化 mRNA 摸板 ；cDNA 3’ 形成发夹结构 （loop）；发夹作为引物合成第二链；需要酶：klenow 和 S1。 第二：大肠杆菌RNaseH酶降解取代法（Replacement synthesis）：RNaseH 在RNA摸板上形成缺口或空隙，从而形成RNA引物； 在E.coli DNA polymerase 的驱动下合成非连续性第二链，需要T4 连接酶接合形成完整第二链。 4、有哪些引物用来合成cDNA第一链？ Oligo dT (T=12-18),；随机引物 (n=6) ； 基因特异性引物(n=18-25) 5、建立cDNA 文库有什么好处？（书） cDNA文库代表生物某一特定器官或组织在某一特定的发育时期，细胞转录水平上的基因群体。因为基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达，而且处在不同的环境条件、不同的分化时期，故基因表达的种类和强度也不尽相同，因此cDNA文库具有组织特异性。一旦获得含有某种组织器官cDNA信息文库，就可用于筛选目的基因、大规模次序、基因芯片杂交等功能基因组学研究。 6、判定从cDNA文库质量的标准？ （1）cDNA的数量: 1-2 million （2） cDNA 的平均长度: 1.5-2.0 kb （3） 全长cDNA的含量: about 50% （4） 空载体, 源于ribosomal RNA的 cDNA 的数10% （5）是否含有目的基因 7、什么是基因表达？ 外源基因(exogenous gene)在生物体内的转录(transcription)，翻译(translation) 和加工过程(post translation modification)的过程。 8、选择表达宿主细胞的原则 生长快，成本低，表达产量高，表达产物的生物活性，容易分离和纯化， 无毒。 9、大肠杆菌作为表达宿主的优缺点 优点：遗传性状清楚、操作简单、生长快、成本低、种类多、很多表达载体可供使用。成功生产了很多治疗性外源蛋白。 缺点：不能糖基化，产生内毒素，不能正确折叠形成核内包涵体（inclusion bodies)。 10、大肠杆菌遗传标记recA是什么意思？ Homologous recombination abolished, desirable for sequences containing direct repeats （同源重组的废除，获得包括直接重复的序列） 11、表达载体应具备的特点, 克隆载体应具备的条件 表达载体应具有的特征： ① 能够独立地复制（origin of replication）； ② 应具有灵活的克隆位点（multiple cloning site or polylinker）； ③ 具有方便的筛选标记（selectable marker），有利于外源基因的克隆、鉴定和筛选； ④ 如果在大肠杆菌中表达，则应具有很强的启动子（promoter），能为大肠杆菌的 RNA 聚合酶所识别； ⑤ 应具有阻遏子（suppressor），使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录； ⑥ 应具有很强的终止子（terminator）； ⑦ 所产生的 mRNA 必须具有翻译的起始信号，即起始密码AUG（start codon）和核糖体结合位点。 克隆载体应具有的特征： ① 能够独立地复制（origin of replication）； ② 应具有灵活的克隆位点（multiple cloning site or polylinker）； ③ 具有方便的筛选标记（selectable marker），有利于外