三角褐指藻Δ5-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, February 25; 25(2): 195-199 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 工业生物技术 5 三角褐指藻Δ -脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母 中的表达 杨哲, 魏东盛, 邢来君, 李明春 南开大学微生物学系 分子微生物学与技术教育部重点实验室, 天津 300071 5 5 摘 要: Δ -脂肪酸脱氢酶是合成花生四烯酸的关键酶。根据已报道的Δ -脂肪酸脱氢酶基因设计引物, 分别从三角褐指 藻基因组 DNA 和总 cDNA 中扩增得到 1520 bp 和 1410 bp 的特异片段, 序列分析结果显示, 结构基因中含有一个大小 为 110 bp 的内含子, 这是国内外首次报道。将Δ5-脂肪酸脱氢酶基因亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体 pYES2.0 中, 在大肠杆菌中筛选到含有目的片段的重组质粒 pYPTD5 , 用电击转化的方法将重组质粒 pYPTD5 转化到 营养缺陷型酿酒酵母菌株 INVSc1 中, 在缺省培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株 YPTD5 。在合适的培养条件下, 添 加外源底物双高γ-亚麻酸和诱导物半乳糖, 培养并收集菌体。通过脂肪酸甲酯气相色谱分析, 表明三角褐指藻Δ5-脂肪 酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效的表达, 将双高γ-亚麻酸转化为花生四烯酸, 其底物转化率达到了 45.9% 。 关键词: 花生四烯酸, 酿酒酵母, 功能验证 Cloning and expression in Saccharomyces cerevisiae of 5 Δ -fatty acid desaturase gene from Phaeodactylum tricornutum Zhe Yang, Dongsheng Wei, Laijun Xing, and Mingchun Li Key Laboratory of Molecular Microbiology and Technology, Ministry of Education , Department of Microbiology, Nankai University, Tianjin 300071, China 5 Abstract: Δ -fatty acid desaturase is the key enzyme in synthesis of arachidonic acid. Two specific fragment was cloned from genomic DNA and total cDNA of Phaeodactylum tricornutum through PCR with primer designed according to the reported sequences, respectively 1520 bp and 1410 bp. Comparison of the genomic and cDNA sequences revealed that the Δ5-fatty Acid Desatu