第五章 体外分析技术课件.ppt

体外放射分析技术;Definition ; 体外放射分析 非放射标记免疫分析;分 类;在廿世纪60年代初，Berson和Yalow首次应用放射免疫分析法定量测定胰岛素，开创了生物活性物质微量测定技术的新时代，是微量分析方法学上的一个突破。由于该法对医学的巨大贡献，1977年Yalow获得了Nobel奖。;RADIOIMMUNOASSAY,RIA;是以抗原抗体的免疫反应为基础，利用待测抗原与定量的标记抗原同有限量的特异性抗体竞争性结合，以放射性测量为微量定量手段，获得待测生物样品中抗原浓度的技术。;Main methods;Main methods;calibration curve;RIA方法的建立;Standard sample 标准品;Radiolabeled compounds 标记物;Specific binding reagent 特异性结合剂;抗血清的制备;抗血清的质量鉴定;Separation technique 分离技术;Preparation of biological sample 生物样品的制备;标准曲线的拟合方式;1、手工绘图：现将目前常用的几种标准曲线的绘制方法介绍如下，以下表中放射免疫分析法的测定值和计算值为例，下述6种标准曲线的方法较为简单，不需要微机处理就可以得到结果。 ;跋丢万淤勋瑰寺质撵衰佑萨窟身砾项溶滑扦有啊母湍表蕉皮于何佣抬龚肤第五章 体外分析技术课件第五章 体外分析技术课件;记揣诧彝员滨奥发深貌剧政卷孤巾壶熊绽狐托京淬悄掠扁燎叁淖卢谈切氮第五章 体外分析技术课件第五章 体外分析技术课件;元衬礼无颤谢确例姐架抉筋绰耶合择眨衔缉床针桔范值体泽费苔细骇鬃孔第五章 体外分析技术课件第五章 体外分析技术课件;阐截柳烁乾素拟婶枯劣牵噬兼胎绚房胯频勇祥策户协浓让世否驻祸烩观勒第五章 体外分析技术课件第五章 体外分析技术课件;公式计算法;2）多项式曲线拟合：多采用三次曲线拟合 Y=b0+b1X+b2X^2+b3X^3 或采用二分之三次方曲线拟合 或采用三次对数曲线拟合 3）样条函数法：;4）四、五参数Logistic曲线;对于S形反应曲线，WHO和IAEA推荐用Logistic函数来描述： Y=(a-d)/[1+(X/c)b]g+d X:未标记抗原的量，即反应剂量 Y：抗体结合标记抗原的量，即反应变量 c：B/B0=50%时相应的未标记抗原量 a:曲线上渐近线的估算值 d:曲线下渐近线的估算值 b:为斜率（ Log－Logit法） g:描述S形曲线拐点的参数;当g=1时，上述方程就演化成四参数方程： Y=(a-d)/[1+(X/c)b] +d 当a=B0，d=NSB时，此方程就是Log－Logit法： Logit(Y)= a＋bLnX Logit(Y)=Ln Y/(1-Y) 因此，此方法可以看作是Log－Logit法的发展，其拟合结果优于Log－Logit法和样条函数。;5）、四参数单纯结合位点质量作用模型：也是WHO和IAEA推荐的模型之一。是扣去非单点结合部位，应用质量作用定律推导而来： [(D+p*+c)b+q]R2+[c(b-1)+q-p*-D]R-c=0 其中：D是未标记抗原初始浓度 p*是标记抗原初始浓度 c是平衡常数的倒数 b是非特异性结合率 q是抗体的初始浓度 R是游离/结合比，即反应剂量。;3、最佳处理方案的选择: 用各种处理方法分析多批测定的数据，然后选取最佳方案。评价处理方法拟合程度高低的参数有： 1）相关系数r: 其绝对值约接近1则拟合程度越高； 2）残差Q：Q（反应剂量期望值与实测值之差的平方和）越小说明拟合程度越高 3）标准偏差S：对于直线回归 S=[Q/(N-2)]0.5 对于三次曲线拟合 S =[Q/(N-4)]0.5 S越小，说明拟合程度越高;4）标准曲线函数拟合百分比偏差（DEV%) ： 将各标准点实测反应变量值代入拟合方程，求得各点的曲线拟合结果，此结果与实际反应剂量之差对实际反应剂量的百分比。 越接近于零，则拟合程度越高。;Quality control 质量控制;C.反映测定标准准确度的质量指标 回收率测定 二样本Youden图 D.反映测定方法灵敏度的质量指标 用最低可测浓度表示测，是指能与不含有标准配体的零标准管的测定结果在统计学上区别开来的最低浓度。累计多批测定结果，计算出Bo%的平均值和标准差，经减去2倍SD后的结合率，从标准曲线上查出其对应的浓度，即为最低可测浓度。 ;1．精密度（precision） 精密度是指在相同条件下，对某一样品多次检测所得结果的符合程度。 一般以标准差（SD)和变异系数（CV)来表示，需要提供批内（SDw、CVw%)和批间变异(SDb和CVb％）。 变异系数越小