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直接ELISA法及间接ELISA法检测HIV抗体对比研究【摘要】 目的 合理选择检测试剂，建立一种准确的ELISA检测方法。 方法 直接ELISA法和间接ELISA法对不同血液标本分别进行HIV抗体的检测，并对结果进行比较分析。 结果 间接ELISA法检测后会出现不同例数的假阳性结果，而直接ELISA法未出现假阳性结果。结论 直接ELISA法检测结果假阳性率低，作为新一代试剂，可逐步取代间接ELISA法。 【关键词】 酶联接免疫吸附剂测定法；直接ELISA法；间接ELISA法；HIV；检测 检测人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)抗体的常用实验方法有蛋白印迹法、酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA)法、胶体金法等。ELISA法的操作步骤简便，试剂成本较低，检测灵敏度较高，尤其适合于标本的快速批量检测，因而我国血站、卫生防疫部门更常使用ELISA法进行血液筛查和检测［1］。ELISA法有直接检测法和间接法，间接ELISA法会造成较大的假阳性检测结果，浪费原本紧张的临床血液资源，打击了一部分献血者的参与积极性，甚至会出现不良社会影响和纠纷［2］。为了合理选择检测试剂，建立一种准确的ELISA检测方法，本文采用直接ELISA法和间接ELISA法分别进行HIV抗体的检测，并对结果进行比较分析，现报告如下。 1 资料与方法 1.1 标本来源 随机选取本中心接收的血液标本314例，采用间接ELISA法检测结果HIV阳性8例的血液标本，经过上级确认实验室确认的HIV阳性3例的血液标本。 1.2 仪器 ETI-MAX3000型全自动酶免分析仪。 1.3 试剂 检测所用的质控血清为卫生部临床检验中心提供。间接ELISA法试剂盒分别购自国内公司 (A)与公司 (B)。直接ELISA法为双抗原夹心法，所用国产试剂盒购自国内某公司(C)，进口试剂盒购自日本某公司(D)。所有试剂均在有效期内使用，严格按照说明书规定的操作步骤进行。 1.4 检测方法 将血液样品离心后，通过自动加样器加样，在全自动酶联免疫分析系统中进行两次免疫初筛。对于初筛阳性血液标本采用双孔平行检测法再次检测。采用GeneLab试剂将ELISA法初筛结果阳性的血液标本进行免疫学蛋白印迹法确证实验。 2 结果 间接ELISA法和直接ELISA法检测HIV抗体的阳性结果比较见表1。可见，间接ELISA法检测后会出现不同例数的假阳性结果，而直接ELISA法未出现假阳性结果。 3 讨论 ELISA法是进行HIV感染情况的最常用初筛方法。间接ELISA法采用非特异性的抗人IgG作为酶标二抗，只可检测IgG抗体，对在微孔板上吸附的抗体无筛查功能，因而间接ELISA法特异性较低。影响间接ELISA法特异性的因素较多，但大比例的是由非特异性因素造成的。这是由于HIV抗原和其他逆转录病毒抗原存在交叉反应，而一些人血清中的HIV抗体和HIV感染的淋巴细胞抗原也存在交叉反应，所以会出现一定比例的假阳性结果［3］。直接ELISA法的采用固相抗原的抗-HIV抗原作为酶标，固相抗原和抗-HIV抗原可对血清中的HIV抗体进行双重识别［4］，因此，直接EL ISA法特异性较高，其检测HIV抗体的假阳性结果比间接ELISA法降低。 可用于ELISA法检测的试剂盒较多，国产试剂盒价格较低、灵敏度较高，而进口试剂盒价格较昂贵、特异性强、稳定性高［5］。目前国内ELISA法检测试剂盒没有采用统一的质量标准，因而国产间接法试剂盒的检测结果出现不同例数的阳性结果。在国产和进口直接ELISA法试剂盒的对比中，二者的检测结果无差异，均和确证实验结果一致。因此，使用国产双抗原直接ELISA法试剂盒来进行血液的HIV筛查工作，成本较低，而特异性、灵敏度均符合要求。 参 考 文 献 ［1］ 殷勤，盛磊. 不同孵育方式对ELISA法抗-HIV(1+2)检测结果的影响. 临床检验杂志，2005, 23 (6):444-446. ［2］ 何红霞，貌盼勇，侯俊，等. 双抗原夹心法检测抗HIV-1/2总抗体方法的建立和评价. 中华实验和临床病毒学杂志，2002, 16 (3):571-573. ［3］ 李蓥玲，黄玲，马海燕，等. 抗-HIV(1/2)间接法与双抗原夹心法的比较. 广西预防医学，2004, 10(1):62- 62. ［4］ 张宏萍. 三种方法筛查HIV抗体的比较. 上海预防医学，2012, 24 (3):155-156. ［5］ 强来英，林旭东，沈彤庆，等. 国产抗-HIV ELISA诊断试剂质量提高的血清学证实. 中国输血杂