抗黄曲霉毒素！单链抗体的筛选和鉴定.PDFVIP

!#$% #’’()*+,%*#) 研究简报 微生物学报 !#$ %’()(*(+$ ,-$ （）： ； ! # #$% #!’ ! ()*+),- .’’ ； /001 ’’’# 2.’ 31 ## #%4 5 ： 6778 449:+,*); = ? = )@ = @*4 )@7)?@,:@* 抗黄曲霉毒素 单链抗体的筛选和鉴定 ! ! 王铁斌，丁虎生，杨炼，纪卿，陈卫 ，张灏 （江南大学，食品科学与技术国家重点实验室，无锡 .#!#.. ） 摘要：【目的】从 （）噬菌体抗体库中筛选人源化抗黄曲霉毒素 单链抗体蛋白（ ）并进行鉴定。 B:?;*:* / O# @EP 【方法】分别采用甘氨酸洗脱、胰蛋白酶洗脱、游离 竞争洗脱和 竞争洗脱加胰蛋白酶处理 种方法 QEO# QEO# ! 对噬菌体抗体进行特异性洗脱。将筛选到的噬菌体阳性克隆转化到大肠杆菌 （ ） ， ./01’0$ (* = RO.#%# 诱导表达 。 检测和基因序列测定。【结果】比较 种洗脱方法，发现用 竞争加胰蛋白酶 /SBT @EP AU/0Q ! QEO# 洗脱筛选到阳性克隆的的概率最高，把此方法得到的阳性噬菌体克隆转化大肠杆菌RO.#%# 表达，竞争性 检测得到 个能特异性结合游离的 阳性克隆。间接性 测定相对亲和力分别为 AU/0Q . QEO# AU/0Q ’ V! K4?U ! 和’ VN K4?U 。测序证实@EP 属于人类免疫球蛋白可变区。【结论】利用噬菌体展示技术获得高特异性抗黄 ! 曲霉毒素O# 的人源化单链抗体，本实验方法可以为其它抗半抗原重组抗体的筛选提供一定的借鉴意义。 关键词：黄曲霉毒素 ；重组抗体；筛选；鉴定 O# 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） 5$ Q ’’’#C2.’ .’’ ’#C’#$%C’2 黄曲霉毒素（ ），是一组化学结构类似的 采用的是薄层色谱法，薄层色谱法、高效液相色谱 QW;)7:F* 化合物，目前已分离鉴定出 种，包括 、 、 、 法和荧光光度法（ ； #. O O T TO4B %’’ V.$C#2 TO4B %’’ V.!C . # 、 、 、 、、 、 、 和毒醇。黄曲霉毒素 .’’$）。但是这