RAPD标记蓖麻单雌性状的反应体系优化.pdfVIP

作物杂志 Crops 20o8．1 RAPD标记蓖麻单雌性状的反应体系优化术 陈永胜 郝卫国 谭颖 朱国立 李金琴 摘 要 以山西单雌、山东单雌、东北单雌、 种优势的应用开辟了捷径，单雌性状也因此成为 法国单雌和转1号标雌等5个蓖麻品种为研究材 蓖麻杂种优势利用研究的热点 。随着分子生物 料，采用改良的CTAB—DNA提取法，从蓖麻叶片 学的发展，特别是分子标记技术的兴起，为蓖麻单 中提取基因组DNA；并通过对RAPD—PCR反应 雌性状的鉴定提供了一个行之有效的方法 。 体系中dNTP、引物、模板DNA及Taq DNA聚合酶 本试验采用多因素试验的方法对RAPD反应 用量的梯度处理，运用多因素试验的方法进行优 体系的4个重要组分用量进行优化，旨在建立一 化。试验结果表明，该反应体系的体积为25 L时， 个稳定的RAPD反应体系，为蓖麻单雌性状的鉴 各反应物适宜用量分别为：dNTP 0．4mmol／L，随机 定和杂种优势的利用提供技术支撑和经验参考。 引物0．21~mol／L，模板DNA 120ng，Taq DNA聚合酶 1 材料与方法 2．5U． 在此反应体系下，扩增效果清晰、稳定。 关键词 蓖麻；单雌；RAPD；优化 1．1 基因组DNA的提取及DNA池的构建 采用CTAB法提取基因组DNA ，进行DNA 蓖麻(Ricinus c口mmun L．)俗称草麻、大麻 质量和浓度的检测。然后将其都稀释为相同浓 子、老麻子，属于大戟科，蓖麻属。其栽培历史悠 度：80ng／ L，并进行等量混合，组成5个品种的混 久，为世界十大油料作物之一，具有特殊的用途和 合DNA池。 较高的经济价值…。单雌蓖麻的发现，为蓖麻杂 1．2 RAPD反应条件优化处理 作者简介：陈永胜，副教授，主要从事作物生物技术方面研究，内蒙 1．2．1 反应初始条件 根据参考文献[5]，确立 古民族大学，028043，内蒙古通辽 蓖麻RAPD扩增反应的基础条件。 郝卫国，谭颖，通讯地址同第1作者 朱国立，李金琴，内蒙古通辽市农业科学院 PCR染料2．5 L；10 X Buffer缓冲液(含Mgn 基金项目：内蒙古自然科学基金(200607010312) 收稿 日期：20O7一l1—15 4mmol／L)2．5 L；dNTP(0．4mmol／L)0．5 L；随机 {·+·+·{… +·+·‘一}·}· { ·÷ ·+·一：、·‘一十 ll · 一t ·十 ·}一l、一} ÷ b-t ·十 - ：…I ．{ ·十叶 一+一}一 + + ·十 ÷ -+ 一 一}· L．．：…：… Prosperous Types of Winter Wheat before Winter and Accumulated Temperature Conditions Correspond’ing to the Typeslng to the 1 一 Yan Lu，Nie Yong，Wang Chao (Jining Extension Centre of Ag