显微鉴别法修订稿.PPT

3.6 表皮撕离装片 适用于较厚的或新鲜药材不便于整体装片的样品。将软化了的或新鲜材料固定住，然后用镊子夹住要剥取撕离的部分，小心的撕离，或用解剖刀轻轻割(刮)去不需要的各层组织，只保留表皮层(上层或下层)，将欲观察的表皮表面观朝上，置载玻片上，加水合氯醛试液加热透化，补充封藏液，盖好玻片即得。 3.7 解离组织片 适用于厚壁组织或输导组织等的单个细胞的显微观察。将样品切成段(长约5 mm，粗约2 mm)或片(厚约l mm)，观察纤维或导管等最好切成纵长的小段。然后根据细胞壁的性质，按照下列方法之一进行处理：对于薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在的样品，可用氢氧化钾法；如样品坚硬，木化组织较多或集成较大群束的样品，可用硝铬酸法或氯酸钾法。 1) 氢氧化钾法 置样品于试管中，加5％氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压，能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取出少量置载玻片上，用解剖针撕开，以稀甘油装片观察。 2) 硝铬酸法 置样品于小烧杯中，加硝铬酸试液（20%硝酸与20%铬酸的等量混合液）适量，使之浸没样品，放置约30~60分钟。坚硬的样品需时要长些，也可在水浴上微温，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，用水洗涤后，照氢氧化钾法操作装片。 3) 氯酸钾法 置样品于试管中，加硝酸溶液(1→2) 及氯酸钾少量，缓缓加热，待产生的气泡渐少时，再及时加入氯酸钾少量以维持气泡持续地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，用水洗涤后，照氢氧化钾法操作装片。 4) 注意事项 用氯酸钾法制片时，每次加入的氯酸钾不可过多，加热温度不宜过高，否则突沸容易使液体逸出管外。加热时间长短因样品的硬度和木化程度而异，通常约需5~15分钟。操作过程中产生的氯气有毒，应注意通风。 用硝铬酸法解离也可在载玻片上进行。即取一块厚度适当的样品，置载玻片上，滴加硝铬酸试液使之浸没，放置约20分钟后，轻轻压下或移动盖玻片使之分离。其余操作同前，此法解离的细胞，可以看清其分离的组织部位。 3.8 花粉粒与孢子制片 取花粉、花药(或小的花)或孢子囊群（干燥样品浸于冰醋酸中软化），用玻璃棒捣碎，纱布过滤，滤液置离心管中，离心，取沉淀加新鲜配制的醋酐与硫酸(9：1)的混合液l~3mL，置水浴上加热2~3分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次，可直接用水合氯醛试液装片，具体操作同粉末标本片。也可加50％甘油与1％苯酚3～4滴，用品红甘油胶封藏观察。 3.9 磨片 凡需观察断面，以一般切片法又无法制作的标本，如坚硬的动物类药材珍珠、石决明、动物骨骼、矿物药等可采用磨片法制片。片的厚度一般为20~50μm。磨片方法有手工磨制与机器磨制。 手工磨制 机器磨制 4 显微测量 显微鉴定时用于测量细胞及细胞内含物等大小的方法最多的是长度测量。常用的量具是目镜测微尺和载物台测微尺。5.1 目镜测微尺又称目镜量尺或目微尺。是放在目镜内的一种标尺，为一个直径18~20mm的圆形玻璃片，中央刻有精确等距离的平行线刻度。目镜测微尺是用以直接测量物体用的，使用前必须用载物台测微尺来标定。5.2 载物台测微尺又称镜台测微尺或台微尺。为一种特制的载玻片，中央粘有一小圆形玻片，上刻有将lmm精确等分为100小格的细线，每一小格长为10μm，用以标定目镜测微尺。 7.4.1 细胞及其内含物的测量方法 将欲测目的物的显微制片置显微镜载物台上，对光，调焦，移动载片，使需测量的目的物置于目镜量尺范围内，调清物象，用目镜测微尺测量目的物的小格数，乘以上述每一小格相当的长度（μm），即得。 4.2 显微测量注意事项 1) 通常在高倍镜下进行测量，结果较为准确。但欲测量较长的目的物为纤维、导管、非腺毛等，在低倍镜下测量较为方便。 4.2 显微测量注意事项 2) 应记录每次测量数据，并分析数据的最小量值、最大量值和多见量值(μm)。如浙贝母粉粒直径为有少量略高于或低于规定的数值。6~56μm，表示最小量值和最大量值；如为6~40~56μm，中间的数值表示多见量值。测量直径时，应以物体中部为准。 3) 测量时，如大小与规定有差异时，允许有少数低于或超出规定范围的数值。 5 显微鉴别法注意事项 5.1 粉碎用具用毕后，必须处理干净并干燥后才能用于另一种药材的粉碎。5.2 所用盖玻片和载玻片应保持洁净。新片要用洗液浸泡或用肥皂水煮半小时以上；用流水冲洗后，再用蒸馏水冲洗1~2次，最后浸置于70%~90%乙醇中，备用。5.3 进行显微鉴别时，一般先以甘油醋酸封片观察，然后以水合氯醛封片观察，最后再加热透化或滴加其它理化试剂进行显微观察。所以在实验中，首先应观察淀粉粒、菊糖等，不论其多少和大小，均应作