结核分枝杆菌-合肥疾病预防控制中心.PPT

结核分枝杆菌 是一类细长略弯曲的长杆菌，由于细胞壁含有大量脂质，能抵抗酸酒精脱色能力，抗酸染色阳性。 缓慢生长菌。 致病性与菌体成分有关，荚膜-多糖；脂质-索状因子、磷脂、蜡质D；蛋白质。 易发生形态、耐药、毒力、免疫性变异。 对干燥抵抗力强，对湿热、紫外线敏感。 结核病化疗 抗结核药物的治疗目的是快速杀灭病灶内的大量快速生长A群菌，以及缓慢和间歇繁殖的B、C菌群，已达到治愈。结核病化疗应该是高效杀菌，低不良反应。 INH对A群结核杆菌有抑制和杀灭作用； A、B、C菌群对RFP高度敏感，均有杀菌作用，是治疗结核病标志性药物；SM对细胞外结核杆菌（A）有杀菌或抑制作用；PZA仅对细胞内（C)有杀菌作用；EMB对细胞内外有相仿的抑制作用。 查痰对象 结核病可疑者 咳嗽、咳痰超过2周 咳血或伴有血痰 发热或胸痛超过2周 胸部X线异常 少量查痰代胸片的受检者 痰标本收集 容器：广口、螺旋盖、可密闭、不易泄漏 标本性状：干酪痰、血痰、粘液痰、唾液 采集时间：即时痰、晨痰、夜间痰 痰标本采集宣教 指导病人： 深吸气2-3次，每次用力呼出 从肺部深处咳出 将打开盖的痰盒靠近嘴边收集痰液 拧紧盒盖 可能需要反复尝试，才能留取一份理想的痰标本 涂片 ? 编号 ? 涂抹痰标本 ? 自然干燥 载玻片： 一张载玻片上只能涂抹一份痰标本。 每张载玻片只能使用一次，不得清洗后再次用于抗酸杆菌涂片检查。 应使用95 %乙醇擦拭或浸泡脱脂，用干燥、清洁、无划痕的新载玻片涂片，在玻片背面左侧1/3处注明实验序号及标本序号（如载玻片有磨砂面，可用2B铅笔书写编号。如载玻片没有磨砂面，必须用玻璃笔(或腊笔)书写编号。 显微镜检查 1.接通电源，打开开关上升聚光镜至最高，调节光圈70－80％大小2.将涂片放在载物台上，痰膜朝上 在油镜下，至少检查300个有用的和有代表性的视野（至少5分钟） 8、结果报告 结果按规定记录在结核病细菌学实验室登记本和化验单上，报告痰涂片结果应注明痰标本的性状。 阴性结果应观察300视野，观察时间不少于5分钟。阴性结果应填写“阴性”，不得以“—”表达。 Bactec MGIT 960的基本原理是其所使用的培养瓶底部含有包被于树脂上的荧光显示剂，由于该显示剂为氧抑制性，当分支杆菌生长使氧消耗后，荧光显示剂被激活，而发出荧光。检测系统每隔60分钟连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分枝杆菌生长情况。 该培养仪可用于痰、支气管盥洗液、胸水、腹水、脑脊液、尿液、脓液、关节液、病灶组织或干酪块各种临床标本的分枝杆菌培养、初步菌种鉴定和药物敏感试验。 结果表明：Bactec MGIT 960与Bactec TB 460、L-J三种方法的阳性率分别为80%、85%和71%，本平均报告时间为分别为13.3天、14.8天和25.7天。 ELISPOT技术优点 特异性好：只针对结核分枝杆菌，对绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗无交叉反应。 灵敏度高：基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有很高的检出率，快速简便。 ELISPOT技术缺点 缺点是操作繁琐， 需特殊仪器设备 试剂费用昂贵 结核病实验室新诊断工具 利福平：rpoB基因 通常检测rpoB基因的常见突变位置 (coding for the α-subunit of the RNA polymerase)来判断利福平耐药性 rpoB基因是编码结核分枝杆菌RNA聚合酶β亚单位， 90~95%的利福平耐药由该基因突变引起，主要集中于509~533的利福平耐药决定区，为高水平耐药。 利福平：rpoB基因 rpoB基因的常见突变位点及频率从高至低依次为：531位、526位、516位、513位、533位。 GenoType? MTBDRplus检测：耐药突变位点 531、526A、526B、516 异烟肼：katG和inhA基因 检测KatG基因(coding for the catalase peroxidase)及inhA基因(coding for the NADH enoyl ACP reductase)来判断异烟肼耐药性； katG基因：编码触酶-过氧化物酶， 40-100%异烟肼耐药是由该基因突变引起且为高水平耐药。 inhA基因：编码NADH（还原型辅酶Ⅰ）烯酰基ACP还原酶，25%异烟肼耐药是由该基因突变引起且为低水平耐药。 GenoType? MTBDRplus检测：katG基因有2个耐药突变位点；inhA基因有4个耐药突变位点。 1.基因芯片 基因芯片始创于90年代