产朊假丝酵母增殖发酵和后处理工艺研究.pdfVIP

万方数据 TheCandidautilisfermentationproliferationand posttreatmentstudies ADissertationSubmittedto ShiheziUniversity InPartialFulfillmentoftheRequirements fortheDegreeof MasterofNaturalScience By QiHong-liang (BiochemistryandMolecularBiology) DissertationSupervisor:Prof.WangWei March，2014 万方数据 万方数据 摘 要 产朊假丝酵母菌由于具有生长繁殖快、代期短，并且具有高产蛋白速率和动物所必需的八种氨 基酸和B族维生素，还拥有丰富的酶系和多种经济价值很高的生理活性物质而被广泛的应用于食品 工业的发酵剂和饮料生产，医药工业的酵母片和重组蛋白药物的表达载体，饲料工业的优质活性蛋 白源。特别是饲料工业以绿色、天然、高效等特点已经广泛应用于畜禽、水产养殖各个方面。 为了获得活性较高的微生物活菌制剂并降低生产成本，本文对产朊假丝酵母的高密度发酵及后 处理工艺进行了详尽的研究。 [1]通过单因素试验对产朊假丝酵母cu-3 的发酵培养基和发酵条件进行了摇瓶优化实验，采用响 [1] 应面方法实验 对筛选出影响产朊假丝酵母增殖发酵最大的三个因素做进一步研究，以确定产朊假 丝酵母增殖发酵的最佳发酵培养基和最佳发酵条件。结果优化出最佳的产朊假丝酵母增殖发酵培养 基组成为蛋白胨36.32g/L，蔗糖76.17g/L，磷酸二氢钾1.98g/L，硫酸镁1.5g/L，硫酸铵1g/L，最佳 摇瓶发酵条件为装液量 100ml （500ml三角瓶），温度28℃，初始pH5.5，接种量12%，摇床转速 200r/min。在此条件下发酵的菌液OD 可达0.927，菌体干重可达 .15g/L，较优化前提高2.08倍。 660 [2]以产朊假丝酵母最优发酵培养基及最优发酵条件为基础，对产朊假丝酵母cu-3进行了 10L发 酵罐分批发酵实验，分别研究了pH和溶氧对产朊假丝酵母分批发酵的影响，确定了产朊假丝酵母 10L发酵罐最优发酵条件。分批发酵实验研究显示，当发酵罐装液量为7L时，最佳通气量为8L/min， 最佳搅拌转速为300r/min，在此条件下发酵可满足产朊假丝酵母生长对溶氧的需求。最佳发酵控制 pH为5.5，选用NH OH 自动流加控制。在此基础上发酵可获得菌体干重为 16.43g/L，菌液浓度可达 4 14 8.5×10 个/ml，较优化前提高了3.06倍。 [3]为进一步获得活菌数较高的产朊假丝酵母冻干菌粉，进行了产朊假丝酵母菌体离心条件的优 化及真空冷冻干燥保护剂的初步筛选和复配优化研究，筛选出了产朊假丝酵母最佳冻干保护剂的配 方。研究确定了产朊假丝酵母的最佳离心条件为离心转速6000r/min，离心时间10min，在此条件下 离心，菌体收得率可达85.88%；产朊假丝酵母冻干最佳复合保护剂配方为甘油4%，蔗糖10%，脱 脂奶粉8%，在此条件下冻干菌粉存活率可达65.50%。 关键词：高密度发酵，产朊假丝酵母，分批发酵，真空冷冻干燥，存活率