韩洁开题报告.ppt

指导教师：蔡柏岩教授 硕士研究生：韩洁 PCR-DGGE技术在原核生物多样性分析中的应用 7.连接转化 将DGGE胶回收扩增后的PCR产物连接到 PGM-T Easy载体上，然后转化进E.coli DH5α感受态细胞中。 将E.coli DH5α扩大培养，挑取单克隆菌落，将阳性菌液送去测序。 连作大豆根腐病病原真菌群落多样性分析 课题背景及研究的目的和意义 1 试验技术路线及主要方法步骤 3 试验中的主要问题、难点 4 课题的创新性 5 可行性分析 6 时间进度安排 8 国内外同类课题研究进展 2 预期结果 7 1.课题背景及研究的目的和意义 课题背景: （3）PCR-DGGE技术 （1）大豆种植现状 （2）大豆根腐病简介 具有极高的 营养价值 重要的 油料作物 中国对大豆需求增大 中国第四大 粮食品种 随着大豆需求量的高速增长，进口数量呈现强劲增长势头，国内市场供需矛盾日益突出。 1996 2000 1000万t 2005 2659万t 2007 3082万t 2010 5480万t 全球大豆贸易量的53.3% 连作 我国大豆连作现象极为普遍，已占播种总面积的20%，黑龙江地区尤其严重，近几年大豆连作面积达到50%～70%。 连作对大豆 生产的危害主 要有两方面： 病虫危害。在连作条件下，由于土壤环境与种植作物相对稳定，容易诱导相同病虫害频繁发生。 土壤理化性质不良。大豆的连作地块施肥量较大，土壤易产生盐分积累，并且因同一种作物的根系分布范围及深浅一致，吸收的养分相同，致使某种养分消耗量增加，而造成缺乏。 根腐病作为大豆连作后主要发生的根部病害，是东北黑土区大豆连作障碍的主要原因之一。 大豆根腐病 大豆根腐病是一种分布很广、危害重、防治困难的世界性病害。近年来，大豆栽培的面积越来越大，大豆连作的状况也日趋加剧，导致大豆根腐病的危害逐年加重，对大豆产量和品质的影响越来越大。 大豆根腐病在大豆的整个生长期内均可发病，甚至种子在感染严重的土壤中即会死亡，尤其在苗期发生多、危害大。其主要侵染大豆皮层，初期形成褐色略凹陷的病斑，继而发展成环绕主茎的大斑块，最终危害侧根，影响作物对水分和养分的吸收。 大豆根腐病可由多种土传病原真菌独立或复合侵染起，目前已报道的病原菌有镰孢菌Fusarium spp.、腐霉菌Pythium spp.、疫霉菌Phytophthora spp.和丝核菌Rhizoctonia spp.等。 黑龙江省已报道过有尖镰孢菌 F. oxysporum、腐皮镰孢菌 F. solani、禾谷镰孢菌 F. graninearum、燕麦镰孢菌 F. avenaceum 和半裸镰孢菌 F. Semitectum。 Myers等首次在DGGE中使用“GC夹板”，从而使该技术日臻完善。 1985 Muyzer 等首次将其应用于微生物群落结构 研究。 1993 DGGE由Fischer和Lerman最先提出，是用于检测DNA突变的一种电泳技术。 变性梯度凝胶电泳（Denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE） 1979 目前，结合PCR和DGGE技术，在适当的变性条件下能分辨出单个碱基对之间的差异，分辨率较高；而且避免了分离纯化培养所造成的误差，通过指纹图谱直接再现群落结构，能够较准确地反映出环境样品中优势种群的动态变化规律。该技术在微生物群落研究中逐渐地被广泛使用。 研究 目的 　　本课题是以大田正常种植大豆为对照，研究连作一年和两年的大豆根际及土壤中的根腐病病原真菌，在大豆根腐病发病高峰的苗期和分枝期取样，使用PCR-DGGE技术来分析根际土壤中高发病期根腐病病原真菌的多样性和它们的周期性变化特点。通过定性分析，研究大豆根腐病病原真菌的群落结构。 研究 意义 本项研究拟将黑龙江省种植面积较大并具有代表性的大田种植的3个连作大豆品种，采用PCR-DGGE技术来分析根际土壤中高发病期根腐病病原真菌的多样性，从而揭示大豆土壤中根腐病病原真菌对大豆种植的影响，为解决连作大豆根腐病减产问题提供理论依据，对提高大豆生产量具有重要的意义。 连作作物对其 根际土壤菌群 结构的影响 连作大豆土壤 的菌群结构 大豆根腐病 病原微生物 连作地块的土壤菌群结构明显异于轮作地块，所以相当多的研究者对不同的连作作物的根际土壤菌群多样性进行了分析，为解决连作障碍打下了坚实的理论基础，如王娟等（2009）通过对连作草莓的菌群结构进行分析，得出了连作会导致细菌数量的降低的结果。 陈慧等（2008）对地黄连