小麦近缘四倍体及六倍体种HMW谷蛋白亚基的鉴定、基因克隆及其序列比较分析.pdf

摘要 小麦高分子量麦谷蛋白亚基(H洲一GS)是由61u一』位点复等位基因编码的一组种 子贮藏蛋白，按分子量大小分为X型和y型亚基，其组成与面包烘烤品质密切相关。 研究显示，小麦近缘种中存在广泛的HMW—Gs等位基因变异，这很有可能成为面包小 麦品质改良的丰富基因资源。本研究以小麦近缘四倍体种栽培二粒小麦(z dicoccum)、六倍体种欧洲斯卑尔脱小麦(7=spelta)和密穗小麦(z 材料，采用SDS．PAGE、2-D 这些近缘种中的高分子量麦谷蛋白亚基进行鉴定。然后根据HMW-GS基因的保守序 ， 序列测定及结构分析。(主要结果如下： 在不同近缘种材料中发现了一些新的HMW亚基，并用三种电泳方法对Bx6．1、 泳图谱。在磷酸．甘氨酸酸性缓冲液(含20％乙氰和O．05％羟丙基甲基纤维素)条件 下，用内径50u 较高的分辨度和重复性。各新亚基在电泳图谱中的出峰时间大致为：Bx6．1：lOmin 2—3个多态峰，其原因可能与蛋白质翻译后的修饰有关。从本研究结果可以看出，毛 细管电泳具有操作简便、成本低、快速、样品用量少、分辨率和重复性较高以及高度 自动化分离等优点，在小麦优质亚基鉴定和品质改良中有广阔的应用前景。 根据高分子量谷蛋白亚基基因5’端和3’端的保守性，设计了4对引物分别扩 结果均得到单一强扩增带，克隆后测序获得了爿月。、Ayl基因的完整编码区序列、砂』。 基因的上游序列和Bx6．1及另两个y型亚基基因的部分编码区序列。 似“CCAA?”框的序列。在5’上游更远端还包含3个与醇溶谷蛋白基因“一300因子” 重复的六肽和九肽占据了整个蛋白分子的75％。Ayl8和Ayl5序列在N一端有5个半胱氨 6在重复序列靠近c一端处还存在1个半胱 酸残基，在c一端有1个半胱氨酸残基，Ayl 21个氨基酸的信号肽，中央重复区序列中有DQQ三肽与六肽和九肽。另两个y型亚 基基因的部分编码区与Dyl2有很高的同源性。 将得到的5个基因与己克隆的高分子量麦谷蛋白亚基基因进行了比较分析，并讨 论了它们在进化中的关系和爿y基因的沉默机理。—／ ， 关键词：栽培二粒小麦；斯卑尔脱小麦；密穗小麦；高分子量麦谷蛋白 亚基；双向凝胶电泳；毛细管电泳；AS—PCR；分子克隆；基因 沉默；进化厂 产 Abstract The molecular a of high seed weightgluteninsubunits(HMW-GS)甜e group storage encoded multi—allelesat inwheat．There Glu一，loci aretwo subfamilies proteins by called and subunits totheirmolecular iswellknown x—type y-type according weight．It that is the of associatedwitll HMW subunits qualityfirml