1999影响酿酒酵母电击转化率的条件.pdfVIP

( ) 第 34 卷 　第 2 期 山　东 　大 　学 　学 　报 自然科学版 1999 年 6 月 　　　　　 　　　　　 Vol . 34 　No . 2 J OU RNAL OF SHANDON G UN IV ERSI T Y J une 　1999 影响酿酒酵母电击转化率的条件 秦玉静 　金建玲 　鲍晓明　高 　东 ( 山东大学微生物技术国家重点实验室) 摘要 　以酿酒酵母为材料 ,用穿梭质粒 p YES2 进行电击转化的条件实验. 实验表 明电击中电压大小、细胞的生长状态、处理条件和电击后细胞的培养时间以及质粒 ( ) 浓度等对电击转化率均有影响. 取对数生长期酵母细胞 ,用二硫苏糖醇 D TT 处理 μ 以疏松细胞壁 ,加 0 . 7 g/ mL 质粒 DNA ,5 kV 电压电击 ,转化后细胞在完全培养 5 μ 基中培养 60 min 后 ,涂布选择培养基 ,转化率可达 4 . 8 ×10 个转化子/ g 质粒 DNA ,细胞的存活率为 39. 2 % ,比完整细胞转化的效率高 ,存活率偏低. 关键词 　酿酒酵母 ; 电击转化 ;转化率 中图分类号 　Q933 ( ) 酿酒酵母 S accharomy ces cerev is iae 是单细胞真核生物 ,它不仅具有生长快 ,便于培 养和遗传操作的优点 ,而且具有比大肠杆菌更完备的基因表达调控机制和对表达产物加 工修饰及分泌的能力 ,因此 ,酿酒酵母作为基因工程的表达系统 日益受到重视. 外源基因 进入酵母菌一般采用转化的方法 ,[ 1～5 ] 建立酵母的高效转化系统对深入地研究酵母菌分 子生物学具有重要意义. 1978 年首次报导了酵母菌原生质体转化法 ,[ 1 ,2 ] 这种方法转化率 较高 ,但原生质体的制备及其再生的步骤比较繁琐 ,不利于转化子的快速制备. 随后建立 了完整酵母转化法 ,[3 ] 方法简捷 ,但转化率偏低. 1985 年 , Karube 等人[4 ] 利用电穿孔法转 化酵母原生质体及完整细胞获得成功后 , 电击转化法以其高转化率 ,操作方便等优点越来 越受到重视. 现在 , 电转化技术理论不断提高 , 已被广泛用于酵母细胞外源基因导入. [5 ] ( ) 本文以酿酒酵母 H158 为材料 ,利用 B IOJ E T M I 电穿孔仪 德国B . Braun 公司生产 ,研 究了电击转化的几个条件 , 以期建立一套高效 、简便的酵母外源基因转化系统. 1 　材料与方法 1 . 1 　菌株与质粒 ( ) ( - - - - ) 酿酒酵母 S accharomy ces cerev is iae H158 his t rp leu ura ; 山东省自然科学基金资助项 目 　 现工作单位 : 中科院化学所 　收稿 日期 第 2 期 　　　　　　　　　秦玉静等 :影响酿酒酵母电击转化率的条件 　　　　　　　　　 237