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猪繁殖与呼吸综合征病毒毕业论文 1 PRRSV病原学 1.1 基因组结构 PRRSV属于尼多病毒目、动脉炎病毒科、动脉炎病毒属，为一种有囊膜的单股正链RNA病毒，长度大概为15.0 kb，其中包括9个开放读码框(, ORFs)。PRRSV的结构蛋白由ORF 2~7 编码，这些序列编码6 个具有帽子结构和poly尾的亚基因 mRNA，并且这些mRNA有共同的 3’端的亚基因组，形成嵌套式结构，同时它们均获得来自PRRSV基因组 5’端非编码区的引导序列[8]（图1-1）。 根据基因的差异，PRRSV大致分为北美型和欧洲型。这两种基因型在全世界广泛传播，它们的基因组序列同源性约为40 %，两者的血清型明显不同[9]，并且每个基因型的不同分离株同时存在约20 %的异源性[10、11]。PRRSV能通过随机突变和基因重组不断演化[12]，其中由ORF5编码的GP5 蛋白是变异性最强的结构蛋白，美洲型和欧洲型之间的氨基酸同源性只有 50 %~55 %[13] 。 1.2 PRRSV蛋白 ORF1a 和 ORF1b 编码病毒的复制酶蛋白，而结构蛋白由GP2a，GP2b，GP3，GP4，GP5，M 和 N 蛋白组成。其中GP2a，GP3，和 GP4 是通过二硫键连接形成异源三聚体并且糖基化的小囊膜蛋白[14]。GP5，M 和 N 蛋白为主要结构蛋白，GP5 为糖基化蛋白，它在病毒感染上起到了重要的作用；M 和 N 蛋白为非糖基化蛋白，其中M 蛋白在病毒的装配和增殖方面起着重要的作用[15]。 1.3 PRRSV的理化特性 PRRSV对氯仿、乙醚等有机溶剂较敏感。pH高于7或低于5时感染力迅速降低，在pH 6.5~7.5之间相对稳定[16]。PRRSV对温度同样表现敏感，经20 ℃ 6 d, 37 ℃ 10~24 h或者56 ℃ 15~20 min处理后病毒滴度下降10倍；在37 ℃ 48 h或56 ℃ 45 min均能将病毒灭活，因此PRRSV在室温环境中存活时间较短，所以用于分离病毒的血清和组织样品应保存在-20 ℃或者4 ℃条件下，以保护病毒的感染性（在4 ℃存放时间不能超过7 d）。 2 PRRSV致病机制 2.1 PRRSV的感染 巨噬细胞和内皮细胞是PRRSV感染的主要靶细胞。Halbur等[17]认为只要存在巨噬细胞的器官和组织，都有可能导致PRRSV感染的发生。Li等[18]报道高致病性的PRRSV 分离株JXwn06有可能向上皮细胞扩散的趋势。已有资料表明，PRRSV首先和猪肺泡巨噬细胞上的受体结合，通过硫酸乙酰肝素(Heparin sulphate, HS)吸附PRRSV到PAMs,通过唾液酸粘附素( Sialoadhesin, Sn)介导PRRSV的内吞, CD163可能协助Sn内吞、病毒脱衣壳和将基因组RNA释放到细胞质中[19-22]。PRRSV感染后巨噬细胞的大量破坏，以致大为降低其对异物的非特异性吞噬清除功能，同时PAMs依赖于超氧负离子杀菌的功能也随之下降，进而易继发其它细菌和病毒感染机体而加重疾病的症状。研究发病机理的另一个领域是PRRSV和胎儿的相互作用，大约在经过90 d妊娠期后病毒可以穿过胎盘感染胎儿。 到目前为止,只有有限的细胞类型能够在体外使PRRSV生长，包括猪原代肺泡巨噬细胞( PAM) 、PIMs、MA - 104 (非洲绿猴肾细胞) 和其衍生物(Marc - 145 和CL - 2621 细胞系) 、CRL - 1171细胞系、公猪的睾丸细胞、猪脾巨噬细胞、血液源单核细胞和脑小胶质细胞[23]。PRRSV的分离株不同，使其适合生长的细胞也不同。有些毒株仅生长在一种细胞上,有些则可以生长在多种细胞上。病毒经过5~7代的传代培养后，感染滴度一般为105~107 TCID50/mL。PRRSV在细胞中呈杀细胞性复制，引起典型的细胞病理变化( CPE) , 但也有极个别毒株在细胞上不出现CPE。 2.2 PRRSV的持续性感染 PRRSV的持续性感染是造成严重危害的一个重要特征。有研究结果证明，PRRSV引起的病毒血症在猪群中可持续6~7周，甚至长达16个月。另有研究表明，PRRSV在感染后63~132 d 都能在扁桃体、淋巴结（肺和非淋巴器官除外）检测到病毒，并且病毒在易感猪群中容易传播，直到260 d血清才成为阴性[24]。形成持续性感染的原因可能有两种：首先，对于宿主而言，PRRSV嗜好在肺泡巨噬细胞、单核细胞等免疫相关细胞中增殖，导致宿主大量免疫细胞损伤和死亡，造成宿主的免疫抑制；其次，此病毒具有广泛的抗原变异性，使之得以容易逃脱免疫系统的识别和清除，造成长期的病毒血症和持续性感染，并导致继发感染[25]。 2.3 抗体依赖性增强作用 ( antibody depende