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* * * * * Molecular Fluorescence Spectrometry 分子荧光光谱法 荧光灯管-电激发发光 3-Br-Carbazole 磷光 光棒-化学反应发光 按激发的模式分类： 按分子激发态的类型分类： 光致发光 化学发光/生物发光 热致发光 场致发光 摩擦发光 分子发光 分子发光 荧光 磷光 分子发光的类型 1852年，Stokes在用分光光度计考察奎宁和叶绿素的荧光时，观察到其荧光波长比入射光波长稍长些，判断这种现象是物质在吸收光能后重新发射不同波长的光，从而导入了荧光是光发射的概念，他还由发荧光的矿石“萤石” 而提出“荧光”这一术语。 George Gabriel Stokes （1819-1903） Natural Fluorescence Green fluorescent protein (GFP) From jellyfish（水母） Widely applied in molecular biology (2009 Nobel Prize) Red fluorescent protein (DsRed) originally isolated from the Indo Pacific sea anemone(海葵) relative Discosoma species h 4 产生机理 1、荧光\磷光的产生 激发后分子的多重性可能改变( S/T两态). 单重态: 所有电子自旋都配对的分子的电子状态。大多数有机物分子的基态是单重态。当处于基态的一对电子中的一个被激发到较高能级，其自旋方向没有改变，分子仍处于单重态。 三重态: 有两个电子的自旋不配对而平行的状态。激发三重态能量较激发单重态低。 分子荧光和磷光光谱分析法 ☆振动弛豫：激发态分子由同一电子能级中的较高振动能级转至较低振动能级的过程，其效率较高，10-14 ～ 10-12s内完成。 ☆内转换：电子在相同多重态的两个能级间，由高能级回到低能级的过程。 ☆系间窜越：不同多重态间进行的跃迁, 激发态分子的电子自旋发生倒转: S1→T1。在10-2～10-6s内完成。 无辐射跃迁过程： 激发态分子的失活: 激发态分子不稳定，要以辐射或无辐射跃迁的方式回到基态。 辐射跃迁: 荧光Fluorescence： 受光激发的分子从第一激发单重态的最低振动能级回到基态所发出的辐射。寿命10-8 ~10-10s，是相同多重态之间的跃迁，跃迁几率、速度较大。 磷光Phosphorescence： 受光激发的分子从第一激发三重态的最低振动能级回到基态所发出的辐射。由于磷光的产生伴随自旋多重态的改变，辐射几率、速度远小于荧光，寿命长（10-4 ~10s）, 能量更低！ Relative position of absorption, fluorescence and phosphorescence bands of chrysene（1,2-苯并菲） 12 激发光谱与发射光谱的关系 a.Stokes位移 激发光谱与发射光谱之间的波长差值。发射光谱的波长比激发光谱的长，振动弛豫消耗了能量。 b.发射光谱的形状与激发波长无关 电子跃迁到不同激发态能级，吸收不同波长的能量，产生不同吸收带，但均回到第一激发单重态的最低振动能级再跃迁回到基态，产生波长一定的荧光。 c. 镜像规则 通常荧光发射光谱与它的吸收光谱（与激发光谱形状一样）成镜像对称关系。 镜像规则的解释 基态上的各振动能级分布与第一激发态上的各振动能级分布类似； 基态上的零振动能级与第一激发态的二振动能级之间的跃迁几率最大，相反跃迁也然。 200 250 300 350 400 450 500 荧光激发光谱 荧光发射光谱 nm 蒽的激发光谱和荧光光谱 ① 共轭效应 产生荧光的有机物质，都含有共轭双键体系，通常1个苯环。共轭体系越大，离域大π键的电子越容易激发，荧光与磷光越容易产生。 化合物 苯 萘 蒽 丁 省 戊 省 λexmax(nm) 205 286 365 390 580 λemmax (nm) 278 321 400 480 640 相对荧光强度 11 29 46 60 62 荧光\磷光与分子结构的关系 有刚性结构的分子容易发荧光，荧光物质的刚性和平面性增加，有利于荧光发射。 ② 刚性平面结构 芴 100 联苯 20 不产生荧光 产生荧光 荧光黄 产生荧光 不产生荧光 酚酞 偶氮菲 偶氮苯 ③