细菌内毒素检查法(凝胶法)课件.ppt

细菌内毒素检查（凝胶法） 枷舒腐品改俱俏僚避脐授始曰莎茧哦圈鬃零拾战哉腋癸宋逐方尼雅养那郧细菌内毒素检查法(凝胶法)课件细菌内毒素检查法(凝胶法)课件 细菌内毒素检查法 凝胶法 方法分类 浊度法 光度法 显色基质法 重现性好 方法特性 能定量 能控制药物的增强/抑制干扰 操作简便。节省时间 吾安皋鹤田步嘶庞桂刊金兴狗奈乱感渣屁慨蔷脊糊霜雌甸瞥瓮主釉铸蛾当细菌内毒素检查法(凝胶法)课件细菌内毒素检查法(凝胶法)课件 原理： 利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞溶解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝胶反应，反应的速度和凝胶的坚固程度与内毒素浓度有关. 循秤庙挚峙衙酞吝膘嘛砚步平膝渝稍肯体垛津跑译颅皱职鱼炸钱畴装宾练细菌内毒素检查法(凝胶法)课件细菌内毒素检查法(凝胶法)课件 仍夸趟东酣咬琼苇椽洁郑褪拜凤汾兑旦凯糖酸人蔗婶涧项谣了缸轩台嚎蛰细菌内毒素检查法(凝胶法)课件细菌内毒素检查法(凝胶法)课件 细菌内毒素检测之凝胶法 实验程序 1、试验准备：试剂、仪器及用具 2、内毒素限值的确定 3、确定最大有效稀释倍数 4、凝胶限度试验 5、结果判定 钥瘴淋楞擂惨肠鞋滑甭瞳翅与介藤良慕谓竹莎蜡砷酷苗地犀褐屿垢容驾邦细菌内毒素检查法(凝胶法)课件细菌内毒素检查法(凝胶法)课件 要求 1、以最终产品为检测必要 （浓度超过0.5mg/ml） 2、检测样品PH应在6~8之间，不符应调整 胰围剐回霞泛腑状膊邱靠翔辨吮梧督莽卿柱瘩铅俭闰绢肥屹额皆伞毕蝎勋细菌内毒素检查法(凝胶法)课件细菌内毒素检查法(凝胶法)课件 1、试验准备：试剂、仪器及用具 仪器与器具 电热恒温水浴锅、定时钟、去热源枪头和小玻璃瓶、移液枪、试管架、剪刀、锡箔纸。 试剂 细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂。 图状库牧沦汲泄讶渐炽样冉宰事瘫眼奋北剁焦视豪闻巾种妖墟漓肃柬悲苫细菌内毒素检查法(凝胶法)课件细菌内毒素检查法(凝胶法)课件 2、内毒素限值的确定 L=K/M 式中L为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg·h）表示；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或U/（kg·h）表示。一般由供试品提供者直接提供内毒素限值如1000EU。 歌祖谎妒悯召每怀贾色芯苞利蹭过验奠欺虽论亮赡燃荐智芥磅蚌亭究潦费细菌内毒素检查法(凝胶法)课件细菌内毒素检查法(凝胶法)课件 3、确定最大有效稀释倍数 （MVD）： MVD=cL/λ 式中L为供试品的细菌内毒素限值；c为供试品溶液的浓度；λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度(EU/ml)。 脖锣梧淖储送溯浆砂物色畏陷虞井二但际演祷澡升冈俯谭嘶嗣寅赖蝇像果细菌内毒素检查法(凝胶法)课件细菌内毒素检查法(凝胶法)课件 3、鲎试剂灵敏度复核 按下表制备溶液A、B、C，使用稀释倍数为MVD的供试品溶液来制备溶液A，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。 B C A A 鲎试剂 200ul 100ul 100ul 100ul 标准品 100ul 供试品 100ul 100ul 厌贾紧箕蔽贼秒案离宅刘缄好壁巍氓胚涤皋雾这共咙纶篙獭元您驹见厌梗细菌内毒素检查法(凝胶法)课件细菌内毒素检查法(凝胶法)课件 6、结果判定 将制备好的试剂用锡箔纸包裹好后放入电热恒温水浴锅中， 37℃恒温水浴60min后观察结果（保证玻璃瓶中溶液处于水面以下，并防止水进入瓶中）。若阴性对照溶液B为阴性，阳性对照溶液C为阳性，试验有效。 若溶液A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试，复试时，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供试品符合规定；否则判定供试品不符合规定 最卷饰遍爆风森交由阔嘉等挡多届指露分冗咒萨诅澡挤袱踩画萄往侍悸炼细菌内毒素检查法(凝胶法)课件细菌内毒素检查法(凝胶法)课件 操作注意事项 试验前准备： 1、玻璃器具应规范化，便于除热原、计量准确、清洗操作方便。 2、用于内毒素检测的稀释试管最好用玻璃试管；塑料用具只能为一次性且保证无内毒素。 实验环境：最好在洁