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转基因小鼠在生命科学中的研究进展毕业论文1转基因小鼠技术概述自其诞生以来的30多年里，转基因动物技术经过世界各国生物学家们的不懈努力，已经成为一项非常成熟的技术手段，极大的促进了相关生命科学领域研究进展，至今已经取得了辉煌的成就并且在不断得到改进和发展[2]。转基因技术运用于动物育种的研究始于70年代，经过近30多年的研究和不断发展，取得了突破性进展。1974年Jaenish和MintzIZI[3]通过微注射法向移植前的小鼠注射SV40病毒DNA，后在实验小鼠部份细胞中检测到该病毒的DNA，首次成功获得转基因小鼠，虽然该转基因小鼠传代的几率小。随着科学技术的不断进步，在1976年，Jaenish又通过反转录病毒感染小鼠的胚胎，将目标基因组整合到实验鼠中得到了能传代的转基因小鼠；1980年,Gordon等[1]首先用受精卵原核注射法,将疱疹病毒基因SV40DNA段和PBR32DNA段分别注射到小鼠原核期的胚胎中,获得了相应的转基因小鼠。1982年美国科学家Palmiter将大鼠生长激素基因导人小鼠受精卵后，获得了首批被称为“硕鼠”的转基因动物[4]。1985年，Hanahan等将SV40T抗原基因与大鼠胰岛素启动子(RIP)体外整合后导入小鼠早期胚胎细中，构建了SV40T抗原基因转基因小鼠，在小鼠体内检测到特异性T抗原，T抗原表达时间的早晚影响转基因小鼠对T抗原的免疫应答：胚胎早期表达T抗原的小鼠对SV40T抗原发生免疫耐受，胰腺组织正常；胚胎晚期表达T抗原的小鼠体内产生抗自身胰岛B细胞的抗体，出现自身免疫性糖尿病[5]。近年来，随着现代分子生物学和转基因动物技术的日臻完善，转基因小鼠及其他转基因动物逐渐成为现代医学及其他学科研究中的一个十分重要的工具。纵观此间发展历程，转基因动物带来的不仅仅是一种全新的药物生产模式，极大地降低生物药品的成本和投资风险，为人类社会带来了新的经济增长点，如今的动物乳腺反应器生产的药物占所有基因工程药物的95％，带来了巨大经济效益，潜藏巨大的市场价值，相信随着应用的不断革新，其必将逐渐形成具有高额利润的新兴产业。另一方面，转基因动物技术在构建诊断和治疗人类疾病的动物模型等方面发挥了巨大作用。作为新生的前沿科技，在转基因动物的发展过程中也存在着一定的问题，需要科学工作者的不断探讨，但无可否认，转基因动物正以它特有的、潜在的优势蓬勃发展，相信随着理论和技术的不断完善，转基因动物及其相关的产品必将进入真正的产业化和市场化阶段，为人类的生产和发展起着推动性的作用。作为全新的疾病研究平台，转基因动物也将为人类疾病研究提供便捷的研究条件，不断推进疾病研究，为人类健康作出前所未有的贡献。2转基因小鼠构建技术2.1转基因小鼠构建主要过程转基因小鼠构建主要过程分为三步:第一步，明确实验动物在特定专业研究中的利害，根据研究需要建立相应的稳定繁育系统，按实验的动物质量标准进行遗传学、微生物学、饲养管理等方面的标准化。第二步，利用分子生物学技术制备目的基因，构建基因载体，再用转基因技术将该外源目的基因转入受精卵。第三步，分析评估含外源基因鼠的优缺点、生理生化特性及预测或解释外源基因在鼠体系统中的表型，用实验动物繁育技术(包括回交、侧交、杂交等)建立生物学性状限定的基因工程动物[6]。基因工程小鼠实验动物标准化的过程主要包括：首先，质量控制是标准化的基础，其中遗传、微生物和标准品系的保种育种是质量控制的核心。遗传质量标准按动物用途，选择各种近交系，利用杂交、回交等技术建立具有稳定遗传背景的小鼠品系，用PCR等技术测定外源基因的整合状况。微生物质量标准控制按微生物种类限定要求，用剖腹产技术和屏障饲喂技术分别产生无菌(GF)鼠、悉生鼠及SPF鼠。保种育种是转基因小鼠能保存及推广应用的关键，目前多采用胚胎冷冻保存鼠种或精子冷冻保种技术。其次，对工程鼠具有的优点和缺陷、生物学功能或疾病模型特性等详细资料登记注册，建立管理信息系统是基因工程鼠推广应用的前提，最后，还得建立并提供相关的繁育技术，如体外授精(IVF)、合子低温保存、胚胎移植、胚胎分割及保姆鼠等辅助繁育技术，这样才能保证基因工程鼠的广泛应用[7]。2.2构建转基因小鼠的主要技术2.2.1原核显微注射法该方法是制作转基因动物应用最广、效果最好的方法，由美国人Cordon所发明。加州大学医学院ThePingLin博士早在1966年即利用小鼠受精卵原核显微注射技术，系统地研究了微注射不同量外源物质(石蜡油、牛Y一球蛋白溶液)对小鼠胚胎受体移植后的分裂、发育的影响程度，并预见该技术用于研究小鼠或其它种类哺乳动物胚胎分化及遗传效应具有潜在价值[8]。直到1980年，随着分子生物学技术的迅速发展，Gordon等[1]首先用受精卵原核注射法,将疱疹病毒基因SV40DNA段和PBR32DN