试剂与染色液制备.pptVIP

萋-尼氏染色法试剂配制与质量控制 碱性复红染色液配制 复红 8.0克 合格级别 乙醇 100毫升 工业级别 酚结晶 5克使用无色结晶 分析纯 蒸馏水 100毫升 碱性复红性状：有金属光泽的深绿色结晶。易溶于乙醇，溶于水，不溶于乙醚。 石碳酸结晶,蒸汽具有腐蚀性和毒性,而且可以引燃,应在通风良好的区域小心配制溶液 石碳酸复红染液： (1)?碱性复红液储存液：碱性复红8g加95 %酒精至100ml，充分振荡使复红溶解。 碱性复红储存液应避光保存，储存液保存不超过6个月。 脱色液配制 5%盐酸乙醇脱色液： 5 ml浓盐酸(35－36%)与95 ml95%乙醇混合。 浓盐酸和95%乙醇均为工业用级别 亚甲兰染色液配制 （1）??? 储存液：0.3 g亚甲兰溶于50 ml95%乙醇中，完全溶解后加蒸馏水至终体积100 ml。 （2）??? 亚甲兰复染液： 以蒸馏水5倍稀释0.3%亚甲兰储存液，经充分振荡、混合均匀后，亚甲兰的终浓度为0.06%，使用定性滤纸过滤。即得亚甲兰复染液 水的质量 不能含有抗酸菌 称量天平 易损坏的精密仪器 必须调整水平 按说明书小心操作 天平精度: ± 0.1 g 已经足够 保证天平清洁且干燥 如果使用称量杯或称量纸时，需要进行调零 试剂标签 每一种配制的试剂均需要进行标记 标记内容至少包括 试剂名称 配制日期 新配制的染色液的质量控制 每批染色液均需进行质控;结果要记录 需要准备阳性和阴性未染色的涂片 阳性: 2+ 结核病人痰标本; 阴性: 阳性片 抗酸菌的数量（阳性分级）如何？菌体鲜红？ 阴性片: 是否含有抗酸菌？ 背景是否为淡蓝色且清晰？ 常规染色的质量控制 每个进行抗酸菌检查的实验室均需进行 至少每周进行一次， 阳性质控片 (2+) 常规进行染色 检查抗酸菌数量（阳性分级）和菌体着色 结果记录在记录本上 染色质控结果不合格 1 阳性质控片染色质量差或者未检到抗酸杆菌 2 阴性质控片检测到抗酸杆菌或抗酸杆菌样物质 3 背景脱色不干净 4 质控片上有染液沉积 保存条件 * (2) 5%石碳酸水溶液：水浴加热石碳酸使之融解，取5 g液态石碳酸＋90 ml热蒸馏水中，待溶液冷却后，补充蒸馏水至100 ml。 (3) 石碳酸复红工作液：10 ml经定性滤纸过滤的碱性复红储存液＋90 ml 5%石碳酸水溶液充分振荡、混合均匀后，使用定性滤纸过滤。 OK × 而不是将酒精加入浓酸中 应将浓酸加入酒精中 避光,密封; 存放棕色瓶中; 避免阳光直接照射; 避免高温高湿的条件 图中所示0.01 g的精度，对于称量8g复红已经远超过要求 指出图中操作的要点， 讨论如何配制碱性复红染色液 . Stress the need for quality contol of new stains including records. Discuss the technique as in the slide. Positives should be checked for strong colour of AFB appearing in numbers as expected for the particular control smears. Negatives should be checked for clean and well destained background, as well as absence of AFB.