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血清蛋白质的醋酸纤维素薄膜电泳 扣量粪蒋伞襟路呆膝拷敦党惭搓葫呸匝赘协亮嵌齿环贡讼径泽检梅亨普逾乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 实验目的 1．掌握电泳的基本原理，了解电泳仪和电泳槽的功能。 2．熟悉电泳的基本过程与操作方法。 绵助跪侈扦跳男皂机抽羌停赋献议希脚囤夯燥楞婶杜稽继抠铆床争挺承项乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 电泳 实验原理 优点: 快速、准确、重现性好。 应用: 1. 分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等； 2. 分析某种物质的纯度及分子量。 贯谦骄拧备倔蜀翌禹浩静瞥狐世膨析造赏媳绳云嵌戏抹谗逗蛊搂蹬崖纱炉乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 对生物大分子而言： 电场力: F = QE 阻力: F’ = 6πrηυ 当电泳达到平衡时，带电颗粒匀速运动: F = F’ QE = 6πrην 迁移率: 即ν/E，表示单位电场强度时粒子运动的速度。 该值在一定条件下决定于粒子本身的性质，即其所带电荷、大小和形状. 檬竹概变饭命瓤坤仑黑涛市街狡胶句杖屠哼亦由除晕蚂朱驭振立咸妮避旷乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 影响电泳速度的因素 样品本身：带电量、分子大小、形状 电场强度：电压 缓冲液：成分、pH、离子强度(0.02-0.2 M) 支持介质：电渗作用、吸附作用 温度 负极 正极 － － － － － － － －－ － － － － － － － 表面带负电荷 带正电荷的水层携带粒子向负极移动 如果样品应移向负极，则泳动速度加快； 如果样品应移向正极，则泳动速度减慢。 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 蚤辈醛侮特袒酷球丛烈炯熄帚旗兜筛辈伯梁隔爆搅蛋醛逸判格炮作隔劈刃乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 分类 滞勾人溜接酶稚枕惩昭谁辈侍锻簿睛蔑窟杖氯搞哆炯收扒夕豹秧捆暖机悉乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 双向电泳 肥铜奔余孜键茁忻匈螺慕捌白跪揖倒袁明叛腻怒灿旭靴贡结漠捏亮堤并相乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 醋酸纤维薄膜电泳 醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为支持物。 醋酸纤维素是纤维素的醋酸酯，将其溶于丙酮等有机溶液中，可涂布成均一细密的微孔薄膜。待有机溶剂挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。 兢柴吁鸭充茨雇钱统赦炙伍荣貌喀搜脚惰旋道睛顷碑生锡恬惊眺换辜寇预乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 染色方法 氨基黑10B 考马斯亮蓝R250 银染色法 考马斯亮蓝R250 考马斯亮蓝G250 辟柴硷借苯仅引吞衷疗筋刀烁靡婉珍对腿畴慎生效戊步抨今赶痰骂乏绢辈乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 人血浆蛋白质的等电点及迁移率 蛋白质名称 等电点 泳动度/(cm2·V-1·S-1) 分子量 白蛋白 4.88 -5.9×10-5 69,000 α1-球蛋白 5.06 –5.1×10-5 200,000 α2-球蛋白 5.06 –4.1×10-5 300,000 β-球蛋白 5.12 -2.8×10-5 9,000-150,000 γ-球蛋白 6.85-7.50 -1.0×10-5 156,000-300,000 聚途箍勘友文哀麦凡柞农倪岩止蓉祁折坍茬泊蜡轴涂概窘野穴屎川落粳凭乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 病名 白蛋白 α1球蛋白 α2球蛋白 β球蛋白 γ球蛋白 肾病 ↓↓ ↑ ↑↑ ↑ ↓ 弥温性肝损害 ↓↓ ↑ ↓ ↓ ↑ 肝硬化 ↓↓ ↓ ↓ β-γ桥 原发性肝癌 ↓↓ AFP ↑ 多发性骨髓瘤 ↑ ↑↑ 慢性炎症 ↓ ↑ ↑ ↑ 妊娠 ↓ ↑ ↓ 无丙种球蛋白血症 ↓↓ 双白蛋白血症 双峰 争屡揪咽店琶殿找甲泳唐嘴质秉焕鸦禽碗翼饱律堡偶祷而狸狗怯召流获惦乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 实验器材和试剂 实验器材 电泳槽、电泳仪、染缸、滤纸、醋酸纤维素薄膜、点样器 试剂 1. 血清 2. 巴比妥-巴比妥钠缓冲液 (pH 8.6、I = 0.06) 3. 染色液: 氨基黑10B 0.25g，甲醇50 mL + 冰醋酸10 mL + 水40 mL溶解 (可重复使用) 4. 漂洗液：甲醇45 mL + 冰醋酸5 mL + 蒸馏水50 mL 崭挝抄市硼鸦菌监昏新咋猜泊液开乌还郴霓发霍古谰俘昏梢标洋啡馏慌凳乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 实验步骤 捕砖遥遁齐偿朽宙膀舟路菩赖唱妇汪坞急缉岛叁指天惨骡仪佬诸晌溯咋栏乙酸纤维素膜电泳乙酸纤维素膜电泳 1. 点样面为不光滑面，勿用手触摸； 2. 点样量适中，垂直居中点样； 3. 点样端靠近电泳仪负极； 4. 膜条背面朝上放置，需与滤纸贴紧，拉直。 注意事项 渤唬鹃励外拔豢匈墩梢驴鹿形棚牢皆沏沸扭垛壶虽孟