pHsh载体对外源基因在E.coli中高效表达的机制探讨.PDFVIP

微生物学通报 SEP 20, 2011, 38(9): 1355− 1361 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 pHsh 载体对外源基因在E. coli 中高效 表达的机制探讨 1* 2 吴华伟 邵蔚蓝 (1. 长江大学 生命科学学院 湖北 荆州 434023) (2. 南京师范大学 生命科学学院 江苏 南京 210097) 32 摘 要: pHsh 是根据大肠杆菌的热休克反应构建而成的新型表达载体, 受 σ 调控。正常 E. coli 细胞的整个热休克反应持续时间约12 min, 而在携带有外源基因的高拷贝pHsh 的E. coli 细胞中, 外源基因却能持续高效表达4−10 h。为探求外源基因高效表达的机制, 以一个编码木聚糖酶的外 源基因为代表, 首先研究了质粒拷贝数对木聚糖酶表达的影响, 接着通过Western-blot 检测了携 带质粒pHsh-xynIII 和对照组携带pLac-xynIII 的E. coli 细胞在非诱导条件下(30 °C)和诱导条件下 (30 °C→42 °C)胞内σ32 的差异, 最后测定了不同温度下(30 °C 、37 °C 、42 °C 、30 °C→42 °C)携带 质粒(pHsh-xynIII) 的E. coli 细胞内稳定状态下热休克的水平(以木聚糖酶活性表征) 。研究结果表明 外源基因在pHsh 中的高效表达是与3 个方面密切相关的: pHsh 质粒的高拷贝数增加了外源基因的 剂量; pHsh 的存在使E. coli 细胞内σ32 的水平较正常E. coli 细胞显著增加了, 并最终增强了E. coli 的热休克反应; 诱导状态下带有 pHsh 重组质粒的E. coli 细胞内稳定状态下的热休克水平明显高 于其它温度的水平。 关键词: 大肠杆菌, pHsh 载体, 热休克, σ32, 表达 Mechanism of high level expression of foreign gene caused by pHsh vector in Escherichia coli WU Hua-Wei1* SHAO Wei-Lan2 (1. College of Life Sciences, Yangtze University, Jingzhou, Hubei 434023, China) (2. College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing, Jiangsu 210097, China) Abstract: pHsh is a novel high level