1.1 DNA重组技术的坏涅本工具(黄).pptVIP

抗虫棉;基因操作的工具; 基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。;基因工程的别名;专题一　基因工程;资料分析;此转基因实验实现了哪种生物的哪些性状在另外哪种生物中表达？ 性状的表达与我们从前学过的什么过程有关？ 要实现药物基因在烟草中的表达，要提前做哪些关键工作?;1.1 DNA重组技术的基本工具;基因操作的工具;DNA重组技术的基本工具;DNA重组技术的基本工具;思考;限制酶在原核生物中的作用 ;识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列， 使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。; 大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端。 SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端 。;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.; T; 限制酶切割DNA后形成的末??——黏性末端、平末端是如何形成的？;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;;什么叫黏性末端？;限制性内切酶;限制酶所识别的序列有什么特点 ;什么叫平末端？;当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。;1、下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的 是（ ） A、①② B、①③ C、①④ D、②③;2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。;要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？;二、 DNA连接酶—— “分子缝合针”;连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·coli连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4连接酶。 这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口，而不能连接单链DNA。 E·coli连接酶只能连接黏性末端； T4连接酶既可“缝合”黏性末端，又可“缝合”平末端。;二、DNA连接酶——“分子缝合针” ;DNA连接酶——“分子缝合针”;;基因进入受体细胞的载体;运载体：;基因进入受体细胞的载体; 基因工程中作为载体使用的DNA分子很多都是质粒，即独立于细菌拟核处染色体DNA之外的一种可以自我复制、双链闭环的裸露的DNA分子。是否任何质粒都可以作为基因工程载体使用呢？其实不然，作为基因工程使用的载体必需满足以下条件。 （1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 （2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 （3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 （4） 载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 （5） 载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。;作为载体的必要条件;;运载体的作用有哪些？;基因的载体——“分子运输车”;练习;不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA; 基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞