14 大肠杆菌基因工车奶.ppt

第十四章 大肠杆菌基因工程;四、 基因工程菌的遗传不稳定性及其对策;一、 大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征;一、 大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征;二、 外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理;a. 启动子最佳距离的探测;b. 启动子的筛选;c. 启动子的构建;d. 启动子的可控性;启动子的可控性;启动子的可控性;启动子的可控性;强化转录终止的必要性;强终止子的选择与使用; 外源基因在大肠杆菌细胞中的高效表达不仅取决于转录启动的频率，而且在很大程度上还与mRNA的翻译起始效率密切相关。大肠杆菌细胞中结构不同的mRNA分子具有不同的翻译效率，它们之间的差别有时可高达数百倍。mRNA翻译的起始效率主要由其5‘ 端的结构序列所决定，称为核糖体结合位点（RBS） ;大肠杆菌核糖体结合位点包括下列四个特征结构要素： 位于翻译起始密码子上游的6-8个核苷酸序列5’ UAAGGAGG 3’，即Shine-Dalgarno（SD）序列，它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合，将mRNA定位于核糖体上，从而启动翻译； 翻译起始密码子，大肠杆菌绝大部分基因以AUG作为阅读框架的起始位点，但有些基因也使用GUG或UUG作为翻译起始密码子； SD序列与翻译起始密码子之间的距离及碱基组成； 基因编码区5’ 端若干密码子的碱基序列 ;核糖体结合位点对外源基因表达的影响;核糖体结合位点对外源基因表达的影响;核糖体结合位点对外源基因表达的影响;核糖体结合位点对外源基因表达的影响;生物体对密码子的偏爱性;密码子偏爱性对外源基因表达的影响;密码子偏爱性对外源基因表达的影响;密码子偏爱性对外源基因表达的影响;质粒拷贝数对细菌生长代谢的影响;质粒扩增时序的控制;三、 大肠杆菌基因工程菌的构建策略;1、包涵体型异源蛋白的表达;1、包涵体型异源蛋白的表达;1、包涵体型异源蛋白的表达;1、包涵体型异源蛋白的表达;1、包涵体型异源蛋白的表达;1、包涵体型异源蛋白的表达;1、包涵体型异源蛋白的表达;1、包涵体型异源蛋白的表达;1、包涵体型异源蛋白的表达;2、分泌型异源蛋白的表达;2、分泌型异源蛋白的表达;2、分泌型异源蛋白的表达;分泌型异源蛋白的表达;2、分泌型异源蛋白的表达;3、融合型异源蛋白的表达;3、融合型异源蛋白的表达;3、融合型异源蛋白的表达;3、融合型异源蛋白的表达;3、融合型异源蛋白的表达;3、融合型异源蛋白的表达;3、融合型异源蛋白的表达;3、融合型异源蛋白的表达;3、融合型异源蛋白的表达;3、融合型异源蛋白的表达;4、寡聚型异源蛋白的表达;4、寡聚型异源蛋白的表达;4、寡聚型异源蛋白的表达;4、寡聚型异源蛋白的表达;5、整合型异源蛋白的表达;5、整合型异源蛋白的表达;5、整合型异源蛋白的表达;5、整合型异源蛋白的表达;5、整合型异源蛋白的表达;5、整合型异源蛋白的表达;5、整合型异源蛋白的表达;5、整合型异源蛋白的表达;6、蛋白酶抗性或缺陷型表达系统的构建;6、蛋白酶抗性或缺陷型表达系统的构建;6、蛋白酶抗性或缺陷型表达系统的构建;6、蛋白酶抗性或缺陷型表达系统的构建;6、 蛋白酶抗性或缺陷型表达系统的构建;四、 基因工程菌的遗传不稳定性及其对策;1、基因工程菌遗传不稳定性的表现与机制;1、基因工程菌遗传不稳定性的表现与机制;1、基因工程菌遗传不稳定性的表现与机制;2、改善基因工程菌不稳定性的策略;2、改善基因工程菌不稳定性的策略;2、改善基因工程菌不稳定性的策略;五、 利用重组大肠杆菌生产人胰岛素;1、胰岛素的结构及其生物合成;2、人胰岛素的生产方法;2、人胰岛素的生产方法;2、人胰岛素的生产方法;2、人胰岛素的生产方法;3、重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;3、重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;3、重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;3、重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;3、重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;3、重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;3、重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;3、重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建