DNA生物合成与损伤修复.ppt

DNA的合成及重组 DNA Biosynthesis and Recombination;DNA生物合成;基因组复制的主要特点 The General features of Genome Replication ;一、基因组是细胞或病毒全部遗传信息的总和 ;二、基因组DNA复制具备一些共同特征;复制起点（origin）：指DNA复制所必需的一段特殊的DNA序列。 ;双螺旋DNA复制时，复制区生长点的结构呈Y形或叉形，称之为复制叉。;从一个DNA复制起点起始的DNA复制区域，它是一个独立复制单位，包括复制起点和终点。 ; （四）半保留复制方式保证遗传信息的忠实传递;密度梯度实验 ;前导链（leading strand）: DNA复制时，一条链的合成方向和复制叉前进方向相同，可以连续复制合成的新链。 后随链（lagging strand）:另一条链的合成方向与复制叉前进方向相反，不能连续复制，只能分成若干小片段分别合成，然后连接起来形成新链。后随链中的小片段称为冈崎片段（Okazaki fragments)。;复制起点的一般特征: ① 由多个独特的短重复序列组成。 ② 短重复序列被多亚基的复制起始因子所识别并结合。 ③ 一般富含AT，利于双螺旋DNA解旋，以产生单链DNA复制模板。 ;E.coli 复制起始点 oriC;酵母复制起点为自主复制序列（autonomously replicating sequences，ARS）： ;DNA聚合酶不能从游离的核苷酸开始合成DNA链，必须由引物（primer）提供自由的3?-OH末端，通过加入核苷酸使之不断延伸。 所有细胞和多数病毒的DNA复制，首先利用模板合成一段RNA引物，这一过程为引发（priming）。 RNA引物5?端的第一个核苷酸通常是pppA（个别为pppG）。;??174等噬菌体以双链环形DNA的一条链上产生切口处的3?-OH为引物； 腺病毒及某些线性DNA病毒以结合于病毒DNA的5?端磷酸基团的末端蛋白上的dCTP的3?-OH为引物开始复制。;三、不同基因组DNA通过不同的模式进行复制;四、不同基因组RNA通过不同的模式进行复制; DNA复制过程 Process of DNA Replication;一、原核生物DNA复制体现了复制的基本过程和特征;DnaA、DnaB、DnaC、HU、 促旋酶（gyrase，即拓扑异构酶Ⅱ）、 单链DNA结合蛋白(single strand binding protein, SSB);;结合oriC的4个9bp反向重复序列形成复制起始复合物。 作用于oriC的3个13bp正向重复序列，DNA在这3个位点解链，形成开放型复合物（open complex）。;5??3?解旋酶作用产生两条复制模板链 激活引发酶DnaG蛋白 DnaB蛋白与引发酶结合，形成引发体;使一条DNA链围绕着另一条旋转，消除解旋产生的张力。;E.coli 中DnaB结合引发酶DnaG，催化合成RNA引物，其序列始于pppAG，模板链序列3?-GTC-5?，引物长度一般11~12个碱基。;负责切除RNA引物。;;２个核心酶 1个?-复合物（?、?、??、?、?、? 6种亚基） 可滑动的DNA夹子（含1对?-亚基）;?亚基（130 000）主要功能是合成DNA ?亚基具有3??5?外切酶活性（校正功能）?亚基可增强其活性 ?亚基可能起组装作用 ;2个?-亚基分别和1个核心酶相互作用，其柔性连接区可以确保在复制叉1个全酶分子的2个核心酶能够相对独立运动，分别负责合成前导链和后随链。; 在复制叉同时合成前导链和后随链;3?;;5??3?外切酶：去除RNA引物 3??5?外切酶：起校正作用 DNA聚合酶活性：填补两个冈崎片段之间的缺口;323个氨基酸;Tus蛋白具有反解旋酶（contra-helicase）活性，识别并结合ter序列中共有序列，阻止Dna B蛋白的解旋作用，从而抑制复制叉前进。 Tus蛋白除了使复制叉停止运动以外，还可能造成复制体解体。;当oriC处于半甲基化状态时，SeqA蛋白迅速结合半甲基化的GATC，阻止Dam甲基化酶与之结合，使复制起点不能被完全甲基化，同时阻止DnaA蛋白结合oriC。 oriC的GATC被完全甲基化，DnaA蛋白就能与之结合，开始新的一轮复制。;在复制过程中，DNA每复制10bp，复制叉前方的模板DNA双螺旋就要绕其长轴旋转一周，产生正超螺旋。 拓扑异构酶是一种可逆的核酸酶。它们可共价结合DNA分子上的磷酸基团，切断磷酸二酯键。;消除正超螺旋，使复制叉能够顺利前进。 维持E.coli、噬菌体和质粒DNA复制起始模板DNA负超螺旋状态。 环形染色体复制后产生的两个子