- 1、本文档共18页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
QTRAP-IDA指南
IDA指南
Information Dependent Acquisition (IDA)自动关联扫描能够在一个色谱过程中进行MS/MS谱的“on the fly ”采集。Analyst Software IDA通过组合特定的survey scans,高分辨扫描和灵敏的子离子扫描产生大量有用的MS/MS数据。在一个典型的IDA实验中,survey scan产生了一个所有出现离子的峰列表。峰列表根据用户定义的标准除去不想要的母离子。留下的离子则进行MS/MS实验。这个循环在整个采集过程中不断重复,产生了大量的信息丰富的数据。
由于Q TRAPTM System仪器灵活性强,有多种不同的扫描选择,所以IDA功能强大而灵活。多个水平的MS/MS和MS/MS/MS可以以完全自动的方式执行。
IDA实验可以手动方式建立或者借助IDA Wizard帮助。本指南介绍采用这两种方式建立IDA实验。另外还描述了一些用于蛋白质组学的典型方法;蛋白质鉴定的标准方法,在多肽混合物中筛选磷酸化位点的方法。
注意:关于不同扫描方式的更多信息参见Q TRAPTM系统的LIT扫描模式。
6.1 击活硬件Profile
打开导航栏(屏幕的左边)中的Hardware Configuration Editor,选择与MS系统相联的LC系统的合适的硬件配置并击活Profile。这些外围设备将自动加入到IDA方法中,所以必需提前选好。关于硬件Profile更多的信息参见LC Packing System指南或者Agilent capLC 系统指南。
6.2 IDA Wizard
双击导航栏的Acquire部分的IDA Method Wizard,可以登录IDA Wizard。
建立IDA Experiment的窗口如下。
IDA Wizard简化了建立IDA Experiment的过程。Wizard包括了三个IDA Method,可以采用4个survey scans。前两个采用线性离子阱MS扫描作为survey scans,即EMS和EMC扫描,然后击发EPI从属扫描。第三个选择是用三重四极杆建立实验,即用母离子扫描或中性丢失扫描作为survey scans击发EPI从属扫描。(关于不同扫描方式的更多信息参见Q TRAPTM系统的LIT扫描模式,或Q TRAPTM系统的四极杆扫描模式。)
6.3 使用IDA Wizard建立一个蛋白鉴定的IDA方法
第一个介绍的IDA实验是一个典型的蛋白鉴别实验,得到尽可能多的多肽的高质量的MS/MS数据。任何一种LIT MS 扫描都适合这个实验,本实验采用Enhanced MSEnhanced Product Ion scan选择。强烈推荐这类实验中使用Enhanced Resolution Scan。母离子的精确性较好,而且可以精确断定离子的电荷状态。其信息优势远远超过执行该扫描所花费的少量的时间。如下所示两个框均打勾后,点击Next。
在下面的窗口中,Enhanced MS Survey Scan的参数被设定。测定多肽质量数的典型的扫描范围为400-1200amu,在Start mass/Stop Mass窗口输入该质量范围。由于母离子的分辨率将在ER扫描中获得,所以使用最快的扫描速度(4000amu/sec)。最后,LIT fill time默认为20ms,在大多数情况下都是好的设置。但是,如果对于样品有一定的信息,也可以进行调整。如果希望得到数量多的多肽则将fill time减少到10ms。如果需要增加灵敏度则将fill time增加到20-50ms。点击Next继续。
下面的窗口定义Dependent Scan的参数。一般地,每次对最强的1-3个多肽进行MS/MS。如下所示,在窗口上方设定。
EPI实验的碰撞能量(CE)可以通过两种不同的方式设定。选择的每一个母离子可以至多有三个不连续的碰撞能量。例如,如果两个最强的离子被选择,两个不连续的碰撞能量被设定,那么在每次循环中将进行4个独立的EPI扫描。对于蛋白鉴别实验,最好采用Use Rolling Energy 设置每一个多肽的CE值。(Use Rolling Energy将在6.5部分的设置IDA选择标准中描述)。其特点是根据每一个多肽的m/z值和电荷状态计算最优的碰撞能量。
在Start mass/Stop Mass窗口输入扫描范围100-1700。在EPI扫描中采用最快的扫描速度(4000amu/sec),碎片离子仍然可以达到单位分辨。这种扫描方式中, fill time设置为50ms,也可以根据灵敏度的要求进行调整。点击Next继续。
以下描述IDA实验的选择标准。
设定潜在的母离子的质量范围,在For ions greater than 和For ion
您可能关注的文档
- Protel课程设计(甲类功放).doc
- PSPiceLM386报告.doc
- PROTOS(ZJ17)卷烟机公司培训课件.ppt
- PS掉线率优化经验总结1018.ppt
- pspice运算放大器 反馈放大 串联稳压电路.doc
- PTFE物理室各项检测指标.doc
- PTT纤维的产品开发.ppt
- PTH教育训练资料.ppt
- PSA制氮机系统说明书20.doc
- pubEnlishandkingEnglishpara1-4课文讲解.pptx
- 2024高考物理一轮复习规范演练7共点力的平衡含解析新人教版.doc
- 高中语文第5课苏轼词两首学案3新人教版必修4.doc
- 2024_2025学年高中英语课时分层作业9Unit3LifeinthefutureSectionⅢⅣ含解析新人教版必修5.doc
- 2024_2025学年新教材高中英语模块素养检测含解析译林版必修第一册.doc
- 2024_2025学年新教材高中英语单元综合检测5含解析外研版选择性必修第一册.doc
- 2024高考政治一轮复习第1单元生活与消费第三课多彩的消费练习含解析新人教版必修1.doc
- 2024_2025学年新教材高中英语WELCOMEUNITSectionⅡReadingandThi.doc
- 2024_2025学年高中历史专题九当今世界政治格局的多极化趋势测评含解析人民版必修1.docx
- 2024高考生物一轮复习第9单元生物与环境第29讲生态系统的结构和功能教案.docx
- 2024_2025学年新教材高中英语UNIT5LANGUAGESAROUNDTHEWORLDSect.doc
文档评论(0)