肠道传染病实课件.ppt

重点肠道传染病实验室检测方法 概述 襄阳市疾控中心 赵耀儒 2014/11/21 霍乱弧菌培养、分型操作方法。 伤寒、副伤寒培养操作方法。 细菌性痢疾（阿米巴痢疾）培养实验操作方法。、 手足口病实验操作方法。 细菌药敏试验 微生物标本的采集 通常有血液、脑脊液、尿液、伤口的脓液、胸水腹水、粪便、痰液及泌尿生殖系统的分泌物。? 1采集的一般原则： a早期采集 b?无菌采集 注意对局部及周围皮肤的消毒。 寄生部位采集的标本应明确目的菌，采用选择培养基。 C?不同菌不同采集方法 D?采集适量标本，量不应过少，注意采集不同时间不同部位标本，要全面。 E?安全采集 2 标本处理 2h送到检验处，部分菌应保温于一定环境中保存。如尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本要保存于4℃环境中，脑脊液保存于25℃。注意安全尤其对烈性传染病。有时可以直接用抽取标本的注射器。 3各部位标本的采集及注意事项 ? 霍乱检验程序 标本的采集和送检 分离培养 鉴定 一、标本的采集和送检 1.标本的采集：标本采集的好坏，对整个检验工作的质量影响很大。粪便标本的采集应争取在发病早期，服用抗菌药物之前并尽快送到检验室。 标本以病人粪便为主。采便方法可用棉拭采取自然排出的新鲜大便，亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3～5cm处采取。采用后者应注意棉拭大小适宜，避免采便量过少。一般要求水样便采取1～3ml，成形便采取指甲大小的粪量。在某些情况下，病人的呕吐物、沾染粪便的衣物和尸体的肠内容物亦可作为检材。 二、分离培养方法 2.增菌后分离培养：所有粪便标本都应经过增菌，尤其是恢复期病人、带菌者或用过抗菌药物的病人标本含菌量少，单靠直接分离不易检出，须经增菌培养再作分离。碱胨水标本管放37℃增菌6～8小时后分离，夏天可将运送时间计算在内。标本如为保存液或半固体保存培养基，则取1.0ml或将棉拭转种至8～10ml碱胨水中，并将棉拭内容物在胨水管壁上挤出。37℃培养6～8小时后，平稳地从温箱中取出试管架，从霍乱弧菌生长最茂盛的菌膜下表层，取一接种环，划线接种于强选择性琼脂平皿。 标本含菌量少时，为提高检出率，可实行2次增菌，取第一次碱胨水增菌6～8小时的培养物的表层液0.1～0.2ml，接种于8～10ml的碱胨水中，37℃培养6～8小时再做分离。 三、鉴定 伤寒杆菌检测程序 三、鉴定1、初步生化鉴定 挑取上述分离培养基上无色、透明或半透明的可疑菌落2一3个，分别接种双糖铁斜面（KIA）和动力靛基质尿素半固体（MIU）各一支，37℃培养18一24小时，观察生化反应。若符伤寒或副伤寒杆菌生化反时，则取KIA斜面上菌苔进行血清学鉴定。 2、血清学分型（1）0血清群别判定　初步生化反应符合伤寒或甲、乙、丙型副伤寒杆菌时，先用A－F群沙门氏“0”多价血清作玻片凝集，以判定其群别。（2）H抗原判定　0抗原判定后，依次用相应的H因子血清检查第一相和第二相抗原与Hd因子血清凝集。（3）Vi抗原检查　新分离的伤寒杆菌有Vi抗原，能与Vi血清凝集。 PCR在感染性疾病病原体检测中的应用 病毒的检测 定量 定性 基因型及基因突变 细菌及其它微生物的检测 难培养菌 耐药基因 寄生虫的检测 手足口病的实验室检测方法 手足口病检测 待检标本类型及检测方法 PCR实验室布局 细菌药敏试验 纸片扩散法 稀释法 抗生素浓度梯度法 自动化仪器法 * * 2.标本的送检：采得的标本应立即接种于培养基。剧烈腹泻病人的水样便含有大量病菌（106～109/ml），直接分离培养不难检出阳性。不能立即检查的，要接种于保存培养基内，尽快送往检验室。送检标本可放入碱性蛋白胨水、文—腊二氏保存液或插入Cary－Blair二氏半固体保存培养基中。后者不仅对霍乱弧菌，而且对其它肠道致病菌也有保存作用。标本与保存液的比例要适当，8～10ml保存液可加入1～3ml液体便或指甲大小的成形便，过多的大便量可降低保存液的pH值。 1.直接分离培养：急性期病人水样大便标本在增菌培养的同时，可取其粘液絮片或用棉拭标本直接作分离培养。这不仅能缩短检出时间，还可避免标本中其他杂菌特别是非O1群霍乱弧菌经增菌后大量繁殖而影响O1群霍乱弧菌的分离 分离培养基有选择性强、弱之不同。选择性强的培养基常用的庆大霉素琼脂和4号琼脂等；选择性弱的有碱性琼脂和碱性胆盐琼脂等。培养基的使用，可根据当地具体情况和各检验室的实践经验来选择。近年的趋势是使用碱性蛋白胨水增菌，再用强选择性培养基进行分离。琼