11乙肝表面抗原检测操作规程.doc

乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA） 1原理： 在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HbsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。 2试剂： 2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法） 2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司 2.3包装规格：96Test/Kit 2.4试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被HbsAb），HbsAg酶标抗体（含HRP标记HbsAb）, HbsAg阳性对照（含基因工程HbsAg），HbsAg阴性对照（正常人血清），HbsAg样品稀释液（含BSA缓冲液），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。 2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。 3样本采集： 取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。 4所需仪器 4.1全自动酶免分析仪 4.2新鲜蒸馏水或去离子水 4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm） 4.4微量移液器 4.5 37℃恒温箱或水浴箱 4.6洗板机或洗瓶 5检验方法 5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。 5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。 5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。 5.4稀释：每孔加入20ul样品稀释液。 5.5加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。 5.6温育：置37℃温育60min。 5.7加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。 5.8温育：置37℃温育30min。 5.9洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每次应保持30~60s的浸泡时间）。 5.10显色：每孔加入底物A、B各50ul，轻拍混匀，37℃暗置30min。 5.11终止：每孔加入终止液50ul，混匀。 5.12测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时，需用空白对照调零），并记录结果。 6结果判定与分析 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD平均值*2.1；阴性对照OD均值小于0.05时以0.05计算。 结果判定：样本OD值S/C.O.=1者为HbsAg阳性 样本OD值S/C.O.1者为HbsAg阴性 阴性对照均值0.1或阳性对照均值0.4时，实验无效，应重新试验。 7质量控制 每次试验用HBsAg的质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，检查试剂校期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至从新试验使其在控。 8参考范围 阴性 9临床意义 在血清或血浆中HbsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。 10操作性能 灵敏度为ng/ml，特异性高 11方法的局限性 11.1此方法仅适用于个体的血清或血浆样本的检测，不适合与混合血清或血浆样本及其他体液样本。 11.2该方法仅作为定性检测乙型肝炎病毒表面抗原。 11.3试剂盒中的阳性对照不能作为灵敏度的考核指标，阳性对照仅用于按照说明书步骤操作时，验证试剂盒中的组分是否有效 。 11.4由于方法学的局限性，本实验结果仅作为判断疾病的一项依据，如需对患者进行确诊，建议施于其它检验手段予以确认。 12注意事项 12.1试验前请详细阅读试剂说明书，任何违反试剂说明书的使用或操作行为，都可能得到不准确的结果。 12.2所有样本、试剂和各种废弃物应按传染物处理，严格防止交叉感染，严格健全和执行消毒隔离制度。对于含有传染病和怀疑含有传染源的物质，应有合适的生物安全保证制度，下列为有关注意事项，但不仅限于此： 1）戴手套处理样本和试剂； 2）不要用嘴吸样； 3）不可在处理这些物品时吸烟、进食、喝饮料、美容和处理隐形眼镜等； 4）用消毒剂对溅出的样本和试剂进行消毒； 5）按科室有关条列来消毒和处理所有样本、试剂和潜在的污染物。 12.3加试剂前应先将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。建议使用加液器进行加液，并经常对加液器进行校准。加液时注意勿使加液枪头接触孔内液体，避免液体间相互污染。仔细操作