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中药长期毒性试验研究问题探讨摘要 近年来中药注射剂临床应用中不良反应的增加，引起人们对中药注射剂安全性的重视，中药新药研究技术要求对中药注射剂毒理学研究提出了严格的要求。本文提出中药注射剂长期毒性试验研究中常见问题——溶血性、刺激性、过敏反应等制剂安全性问题对毒理学试验研究的影响，长期毒性试验剂量与用药周期的设计、给药方法及对实验结果分析方面的问题。总结了上述问题，并提出一些看法与解决办法。关键词 ? 中药注射剂 ? 长期毒性 ? 制剂安全性 ? ? 随着中药现代化的进程、中药新剂型的研究逐年增加，特别是近年来新药研究热潮的出现，提出中药注射剂的注册申请数目逐年增加，1998-2000年8个，而2001-2003年上升到60个。由于《中药新药研究技术要求》和新的《药品注册管理办法》的实施，对中药注射剂提出了新的毒理学要求；外加研究单位与委托单位的目的不完全一致或沟通不够等种种原因，致使中药注射剂，特别是静脉给药注射剂的毒理学研究常常出现各种各样的问题。笔者就五年来所进行的实验和审阅过的近百个毒理学资料中出现的问题提出来与同行们共同探讨，以期今后在毒理学研究特别是中药注射剂长期毒性试验研究中避免出现不该出现的问题，减少投入和研究工作的反复。一、中药注射剂制剂安全性的问题? 中药注射剂不同于一般口服制剂，首先是要满足注射剂安全性的要求，对新药临床研究用药样品都要求进行全面的制剂安全性试验，但对用于毒理学研究样品往往没有进行相应的研究，或仅对溶血、热原关注较多。中药制剂毒性相对较小，长期毒性试验剂量往往可达临床用药剂量的几十倍，甚至百倍以上。而如此高的剂量，因限于给药体积，增加药物浓度成了提高剂量的常用方法。药物浓度的增加，可引起注射剂性质的改变，如渗透压、pH值、刺激性、溶血性等改变，对于溶解性不好需采用助溶剂的药物更为明显。这些改变导致毒理学样品本身已不完全符合注射液的要求，如就此样品进行长期毒性研究往往出现各种问题。? 1．溶血作用 对临床用药样品必须进行溶血性试验，符合要求者方可应用于临床。毒理学用药样品因浓度增加易出现溶血反应，如未进行本项研究而直接进行长毒试验研究，很可能因溶血而致动物死亡。在犬静脉注射或大鼠腹腔注射预试验中对溶血作用较弱的受试药物，短时间内不易观察到溶血反应的影响，但在长期用药后势必引起体重下降、精神萎糜、RBC、HGB的降低、Tbil的升高等毒性反应。因此，对含有具有溶血作用的吐温、PEG-400等助溶剂，皂苷或其他可能引起溶血的成份者，应进行多个稀释度的溶血试验，以确证没有溶血作用的浓度。如确实需要提高药物剂量，在犬静脉给药时可考虑采用具有细胞膜稳定作用的葡萄糖注射液作为溶剂，或增加给药体积，同时控制给药速度。笔者进行过一枝黄花注射液的急性毒性预试，给小鼠iv 0.1ml/10g体重的2.0g生药/ml的受试验物（20g/kg），给药后四小时内除活动减少外，未见其它异常改变，次日10只小鼠全部死亡。进行溶血试验后表明本2.0g生药/ml一枝黄花注射液有明显溶血作用，1.0g生药/ml有轻度溶血作用。再次采用1.0g生药/ml，给小鼠iv0.2ml/10g体重（20g/kg），结果仅有30%动物出现死亡。因溶血作用，对于同是20g/kg的给药剂量，只因药物浓度的不同，结果可存在很大的差别。? 2．刺激性 ? 对于样品中存在皂苷、挥发油、具有刺激性的助溶剂等成份，在浓度增加时势必增加刺激性。具有刺激性的受试药物，长毒试验采用肌肉注射易出现肌肉组织变性、坏死，特别是用药周期较长者；对于一些大鼠腹腔注射中出现扭体反应或犬静脉注射出现红肿的样品，在长毒试验中均要注意刺激性对最后试验结果的最后影响。具有制剂刺激性的受试药物对大鼠的腹腔注射影响大于犬的静脉注射，原因是药物在腹腔中停留时间较长，对腹腔内各脏器与腹腔粘膜长期反复刺激易出现腹腔内的脏系数增加、脏器粘连、甚至脏器变性坏死等病变，还有可能引起非腹腔内容的脏器改变。? 中药注射剂的刺激性对试验结果影响较大，可直接影响到对药物安全性的评价。我们曾做过一个用40%PEG-400做溶剂的难溶性中药注射液的急性毒性试验，试验结果表明溶剂的LD50与含药物样品的LD50极为相近。另进行清开灵冻干粉急性毒性试验时发现给小鼠iv1.82g/ml可见明显的刺激反应，小鼠在给药过程即可死亡，解剖可见肺脏明显充血，进行稀释一倍后反应明显减轻，两倍稀释后未见动物死亡，原因可能是方中高浓度的去胆氧酸和胆酸引起。可见刺激性可明显影响毒理试验结果。对于含有人参、黄芪、三七等含皂苷成份药材或石昌蒲、金银花、柴胡等含有大量挥发油成份药材的受试药物在试验中应注重刺激性问题。我们实验室进行了注射用参麦冻干粉和参芪注射液长期毒性试验均存在大鼠长毒试验中高、中剂量组肝、脾、