非常有用的固体物理实验方法课第3章_光学显微分析课件.ppt

第三章 光学显微镜习题 1.光学透镜的成像原理 光的折射 、光的衍射。 2.金相试样的制备的过程 取样、镶样 、磨光 、抛光、显示。 3.透镜的像差 球差、色差。 4.显微镜的能力 数值孔径、分辨率、放大率、焦点深度。 5.实际操作 * 【图片说明】 1590年代荷兰眼镜制造商J.Janssen和Z.Janssen父子制作了第一台复式显微镜，尽管其放大倍数不超过10倍，但具有划时代的意义。 * 【图片说明】 1665 英国人Robert Hook用自己设计与制造的显微镜（放大倍数为40-140倍)观察了软木（栎树皮)的薄片，第一次描述了植物细胞的构造，并首次用拉丁文cella（小室)这个词来称呼他所看到的类似蜂巢的极小的封闭状小室（实际上只是观察到到纤维质的细胞壁)。 * 【图片说明】 1680荷兰人A. van Leeuwenhoek成为皇家学会会员，一生中制作了200多台显微镜和500多个镜头。他是第一个看到活细胞的人，观察过原生动物、人类精子、鲑鱼的红细胞、牙垢中的细菌等等。 * 【图片说明】 光学显微镜 1、复式显微镜(compound microscope) 利用穿透光，也就是光线透过物体再进入眼，因此，观察的物体必须很薄，成透明状时，光线才能穿透，常需染色。通常显微切片，先将标本固定、封蜡，再利用切片机将标本切为5~15μm的厚度，最佳复式显微镜倍率不超过1000X，解像力约为人眼的500倍。 * 【图片说明】 光学显微镜 2、位相差显微镜(phase contrast? microscope)复式显微镜中较复杂者，此种显微镜在光线通过物体的各部时，会改变光线的位相，而使各部呈现对比的情形，此种显微镜标本不需要经过一般复式显微镜的处理，可以观察活细胞内的各种构造。 【位相差显微镜】 位相差显微镜（phase contrast microscope）相差显微镜是能将光通过物体时产生的相位差（或光程差）转变为振幅（光强度）变化的显微镜。人的眼睛只能鉴别可见光的波长（颜色）和振幅的变化，不能鉴别相位的变化。但是大多数生物标本高度透明，光波通过后振幅基本不变，却存在相位的变化，人的眼睛感觉不到。19世纪30年代德国物理学家泽尼克首先设计并于1942年制造了第一台相差显微镜，能将这种看不见的相位变化转变为看得见的振幅变化，由于此项发明，泽尼克于1953年获诺贝尔奖。相差显微镜主要用于观察活细胞，不染色的组织切片或缺少反差的染色标本。 * 【图片说明】 光学显微镜 3、立体解剖显微镜(stereoscopic dissecting microscope)此种显微镜放大倍率为4X至40X或更高，其倍率虽然不高，但是可以观察不透明的物体，因为光线是物体表面反射入镜，与复式显微镜不同，使用时用两眼观察，可观察到立体物像，且可边观察边解剖。 物镜的识别 1）物镜类型 国产：用英文缩写 国外：用英文名称 2)放大倍数 用数字表示，如4×、10 × 、20 × 、40 ×和100 ×等。3)数值孔径（N．A） 如／0.25，／0.65和／1.34)标准机械筒长 160／0.17 160／0或160／-；∞／0或∞／-5)需用盖片情况6)物镜与被检样品间的介质情况 干镜头一般不标符号，凡油浸标“HI”或“oil” 目镜(eyepiece，ocular) 目镜可分下列几种：1．惠更斯目镜(Huygeian eyepieces)2．兰姆斯登目镜(Ramsden eyepieces)3．补偿目镜(compensating eyepieces)4．平场目镜(planeyepiece)“PEN— PLAN”、“PLANOSCOPIC”、“PLAN”、“KPL、“GF”和GW”等。5．摄影目镜(photographic·eyepiece) 1．钨丝灯 通常，工作电压6-8 V,功率15-100W 2．卤钨灯 “碘钨循环”I2---2I---WI2---W+I2 3、碳弧灯 采用交流电，使相互接近的碳棒，产生强烈的电弧而发光 4、氙灯 石英玻璃管内装钨电极并冲入高压氙气，利用放电发光 照明光源（light source） 聚光镜（condenser） 光源射出的光线通过聚光器汇聚成光锥照射标本，增强明度和造成适宜的光锥角度，提高物镜的分辨力。聚光器由聚光镜和虹彩光圈组成。调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小，可得到适当的光照和清晰的图像。 滤光片（filter） 选用适当的滤光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色的，分别透过不同波长的可见