杨树黑斑病感抗无性系cDNA文库的构建.PDFVIP

第 28 卷第 3 期 南 京 林业大 学学 报( 自 然科 学 版) Vo l. 28 , No . 3 2004 年 5 月 Journal of N anjing Forestry U niversity( N atural Sciences Edition) May , 2004 杨树黑斑病感抗无性系 cDNA 文库的构建 曾燕如1 ， 2 黄敏仁1* 王明麻l ( 1 南京林业大学，江苏 南京 210037; 2. 浙江林学院，浙江 临安 311300) 摘 要:为了分离与抗病相关的目的基因以病原菌接种后对黑斑病具免疫力的美洲| 黑杨 I-69 及黑斑病的高 感无性系欧美杨 I-45 的叶片为材料， 在利用荧光差异显示反转录聚合酶链式反应( DDRT-PCR) 获得抗病相 关 cDNA 片段的基础上，用试剂盒及同样的植物材料构建了两个 cDNA 文库 L4:← 72 及 L69- 72。两文库的滴 9 9 度分别为 3 .44 x 10 pfu/ mL 及 3.94 x 10 pfu/ mL，大于 500 坤的片段分别占 96.67% 和 73.33% 。 关键词: 美洲| 黑杨;欧美杨;杨树黑斑病;cDNA 文库 中图分类号 Q78 文献标识码:A 文章编号 1000- 2006(2004)03- 0083- 03 Construction of cDNA Libraries with Leaves of Oones Susceptible and Resistant to Black Spot Disease in Poplar 1 1 ZENG Yarrru , 2 , HUANG Min-ren * , WANG Ming了 xiul (1. Nanjing Foreslry U ni ver sil y , Nanj ing 210037 , China; 2. Zh ejiang For eslry Colleg e, Lin an 311300 , China) Abstract: In order to isolate t arget genes associated w ith disease resist ance , tw 0 cDN A libraries viz. L4:• 72 and L69- 72 were constructed on the basis of ant • disease cDNA fragments obtained by fluorescent DDRT-PCR with readγto-use kits and pathogen-inoculated poplar leaves of 1-69 and 1-45, two clones either extremely resistant or susceptible to black spot disease in poplar. The li- brary of 1-45( L4:• 72) had a titer of 3.44 x 109 pfu/ mL and the library of 1-69( L69- 72) had a 9 titer of 3. 94 x 10 pfu/ mL , w ith inserts larger than 500 bp accounting for 96. 67% and 73. 33% ,