克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中应用课件.ppt

克隆性基因重排在淋巴瘤诊断中的应用;Clinically Suspicious LN;分子和细胞遗传学异常;简要原理 检测方法 应用和策略 注意事项;淋巴细胞表面受体;IG和TCR基因结构及重排过程;各区片段数多 重排的多样性 抗体多样性;淋巴细胞发育过程中基因重排顺序;淋巴瘤中基因重排形式——克隆性重排;克隆性重排的检测方法;特异性探针： 胚系的特征性片段外 另一不同大小的片段;PCR法;引物的选择原则;该协作研究由47个研究所组成7个网络和一个病理panel。它由分子生物学、免疫学、血液学、病理学等领域的专家。 1998.6-2002.7， 12次国际性会议。 主要目的： （1）开发和标准化PCR实验操作和PCR引物 （2） 评价和应用该标准化方法 ;设计了一套完整的引物和方法用于IG和TCR基因重排的克隆性分析，共有14管97对引物 IGH（A,B,C,D,E 5管） IGK（A，B 2管） IGL（1管） TCRB（A，B，C 3管） TCRG（A，B 2管） TCRD(1 管) Van Dongen JJM et al. Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations: report of the Biomed-2 concerted action BMH4-C98-3936 Leukemia 2003;17:2257-2317 ;所有引物采用相同的扩增条件和检测方法，并具有很高的敏感性和特异性， 已被推荐为可疑淋巴组织增生性疾病克隆性分析的标准方法，试剂已商品化 /;PCR产物分析方法;2. 毛细管电泳基因扫描（genescan）;对照的设立;对照的设立;克隆性基因重排的应用;（1）形态和IHC不能得出肯定结论的淋巴组织增生性病变 胃肠道、肺、涎腺、甲状腺、眼眶等部位的MALT淋巴瘤 滤泡性淋巴瘤、皮肤淋巴瘤和T细胞淋巴瘤 形态不典型，缺乏特异性标记;CP2170, 66M, 胃黏膜活检 CP2171, 43F, 左腮腺肿块;;（2） 形态和免疫组化均可考虑为淋巴瘤 但部位少见或发病年龄不典型 基因重排克隆性分析可增加诊断的依据;17F, 右颈淋巴结肿大;3. 组织小或无法取得组织病变的诊断;(4) 淋巴瘤谱系的判断 T or (富于T) B? T or NK/T? , T or γδ-T ? ;内 γ 1 γ2 β1β2; (5） 比较两个淋巴瘤克隆性的相关性， 或区别复发和第二原发肿瘤。 组织细胞/树突细胞肉瘤- ALL, T淋母 ( 6） 外周血和骨髓累及情况 ;MRD理想的检测方法： 活检组织的PCR产物克隆， 对连接区进行测序， 再设计病人特异的引物做real-PCR进行MRD的评价 ;应用策略;;;1. 克隆性不等于恶性： 有些良性病变有时也有克隆性重排 　CD8+（有时CD4+) T 细胞增生症 　良性单克隆性r球蛋白病 　EBV阳性的淋巴细胞增生 （AILT) 自身免疫性疾病(Sjogren 综合症,风湿性关节炎) 免疫缺陷状态(先天性,移植后,HIV感染) 免疫调节异常疾病（Castleman 病） 皮肤异常病变（淋巴瘤样丘疹病，急性苔藓样糠疹） ;30例LyP病例TCR基因重排总体阳性率80% 20例CALCL病例TCR基因重排总体阳性率100%， 两组病例TCR基因重排阳性率无统计学差别（P0.05) 表明TCR基因重排在LyP和CALCL的鉴别中无应用价值。 ;２．Ig和TCR基因重排不一定是谱系的标志： 　　　　　某些T、B淋巴瘤有基因重排的交叉 ;前T细胞性白血病/细胞淋巴瘤;蕈样霉菌病;少量淋巴细胞 小标本或高负荷B细胞淋巴瘤中有少量反应性T细胞 EBV或CMV感染 免疫抑制患者 淋巴结或外周血中TCR的某些组分重排占优势,重排多样性受限制,可出现寡克隆信号。 假克隆和寡克隆信号表现：弱条带或两条以上条带 辨别方法： 多次重复，大小不同的条带 只有那些可重复的相同大小的条带是可信的单克隆性条带