受体介导胞吞作用课件.ppt

受体介导的胞吞作用Receptor-Mediated Endocytosis;前言;问题的提出;1964年，哈佛大学的Thomas Roth和Keith Porter报道了有关蚊子的卵黄进入卵母细胞的可能的机理。他们注意到在卵母细胞快速增长时期，在卵母细胞表面有许多压低的纹孔，数量呈戏剧性的增长。这些纹孔，是由原生质膜的凹陷构成的。在它们的内表面被一层粗糙的表层所覆盖。 ; 在一项有远见的计划中，Roth和Porter假定卵黄蛋白是被特别的吸附在有被小窝(coated pits)的膜的外表面，并将作为有被小泡（coated vesicles)而吸入。这些有被小泡脱离粗糙的表层后，一个与另一个结合，使得它们变得更大。 ; ; 在生化自然杂志中的第一份有关有被小泡的研究是由Barbara Pearse于1975年在英国剑桥大学的一次医学研究会议上发表的。Pearse揭露了一个过程。此过程是通过将猪大脑的小泡膜通过一个连续的蔗糖浓度梯度做离心，直到有被小泡达到纯化分离。有被小泡中的蛋白质通过SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳被溶解和分离。;这个结果表示被膜含有一个分子量大约在180000道尔顿的占优势的蛋白质种类。Pearse命名这个蛋白为网格蛋白（clathrin)。他通过对几种不同类型动物细胞的分离，都发现了有被小泡在形成中的与此相同的蛋白质（从分子量和多肽图考虑的）。;新的研究; Brown和Goldstein开始了对FH的研究，他们分别取正常人和FH患者的皮肤所派生的成纤维细胞(fibroblast)进行培养，检测胆固醇(cholesterol）的代谢过程。他们发现在胆固醇合成中酶的控制率，HMG辅酶A还原酶可以在正常的成纤维细胞中被环境中的脂蛋白（lipoprotein)（例如LDL）抑制。（图2）;测量正常成纤维细胞中的HMG CoA还原酶活性。;;在发生FH的成纤维细胞中测量HMG辅酶A还原酶水平，发现它们是正常成纤维细胞的40~60倍。另外，全部FH成纤维细胞中的酶活性不受在环境媒介中LDL出现的影响。（图3） ;;环境中的脂蛋白是怎样影响人工培养细胞的细胞质中的酶活性呢？ 为了解释这个问题，Brown和Goldstein开始了对细胞和脂蛋白之间相互影响的研究。;他们向培养皿中加入了放射性标记（radioactively labeled)的LDL，培养皿中包含有从FH患者或正常人中获得的成纤维细胞。正常的成纤维细胞以高亲和力特性结合被标记的LDL分子，但是突变的细胞显示出实际上没有能力与这些脂蛋白分子结合。（图4）;; 这些结论表示出正常细胞有一个LDL的高特异性受体，这个受体在有缺陷的或者在FH病人的细胞中丢失。 ;为了显像受体结合和内化作用（internalization)的过程，Brown和Goldstein与Richard Anderson合作，Richard Anderson利用电子显微镜对细胞的结构有所研究。; ;;在这些膜上的片段是有被小窝，最初被Roth和Porter描述，并且在各种细胞类型中被发现。尽管来自FH病人的的细胞的表面被发现有相似数量的有被小窝，但没有LDL—铁蛋白结合在这些突变细胞上。这结果支持了突变的FH等位基因翻译成受体，而这个受体并没有能力结合LDL。后来用电子显微镜对LDL—铁蛋白的内化作用进行研究，显示出胞吞作用的路径是这些脂蛋白的内化。 ; 基于这些结论，这个小组假定受体结合LDL的内化作用是在有被小窝中LDL受体的某部位密切相关的。接着这个假定，如果一个LDL受体不能在有被小窝上固定的，它就不能传递它的结合配体给细胞的溶酶体（lysosome），并且这样将不能影响在细胞中胆固醇的合成。;这时，一个不同类型的突变的LDL受体被发现。LDL受体提供了这个新的缺陷（通过病人发生J.D突变所了解的）结合放射性标记的LDL的正常总数，受体结合脂蛋白不能被内化，所以就不能被传送至细胞质的溶酶体进行加工。 ;Anderson和他的合作者假定LDL受体是一个跨膜蛋白，正常的会固定的在有被小窝上，因为它的细胞质区域是与有被小窝的成份特别的结合。可能网格蛋白（但是后来有关联的，例如适应物的小亚基，正如下面讨论的）因为这个在细胞质区域的缺陷，J.D突变受体是不能在细胞的有被小泡固定。有这种突变的人表现出相同的表现型，因为病人的受体是不能结合到LDL上的。;后来的研究决定了正常的LDL受体是个有839个氨基酸的跨膜糖蛋白，并在蛋白的C末端有50个氨基酸从膜延伸至内部作为细胞质的一个区域。在对J.D突变受体的分析中显示出蛋白质包括了一个简单的氨基酸代谢：一个酪氨酸残基正常定位的807位置被半胱氨酸取代。这个简单的在氨基酸序列上的变化消除了蛋白质在有被小窝上变得集中的能力。;;在接下来的几年中，