成分“敲出-敲入”理论下中药牛黄药效物质辨识模式研究.docVIP

　　成分“敲出/敲入”理论下中药牛黄药效物质辨识模式研究 --第一章绪论 中药是中华民族的宝贵财富，是我国劳动人民几千年来通过实践、不断认识，逐渐积累来的。中药质量控制是实现中药现代化发展的关键，而中药药效物质辨识则是支撑中药质量控制的重要基石⑴。 由于中药化学成分极其复杂，尤其是复方制剂，其疗效并不是单一活性成分的作用。现行的中药质量控制方法中所关注的指标性成分不一定是专属成分，也不一定是药效物质。迄今为止，《中国药典》（2010版）中己阐明有效成分的中药品种不到5%，绝大部分中药的有效成分仍未得以阐明[2]。且现行质控标准中指标性成分含量的限量范围，主要是根据随机选取的多批样品中该物质的含量大小分布而人为设定，成分限量范围与中药的安全性和有效性关联度不足[3]。中药质控标准难以客观表征中药质量，其很重要的一个原因在于现行的中药药效物质辨识模式，辨识中药药效物质基础则是中医药研究的热点和难点。 ........................................ 1.1中药物质基础的研究思路和方法 近年来，研究者提出了多种研宄中药药效物质蹄选的方法和思路，丰富了中药的研究内容，促进了中药学的发展。目前，现行的中药药效物质辨识模式主要有以下几大类。 1.1.1基于经典的植化分离的中药药效物质辨识模式 此研宄模式主要以发现新化合物为主要目的，是一直以来，中药化学成分研究经常采用的研宄思路，相关的中英文文献较多。该方法为对中药材的成分进行分离纯化，对得到化合物单体进行结构鉴定并确定其理化性质，进一步通过相关的经典的动物药理或体外活性实验对其进行测定，最终确定该单体化合物是否为此中药材的药效物质基础。尽管基于此模式辨识中药物质基础已取得了一定的成就，但中药现代化发展所要求的“完全阐明其物质基础及药效物质基础”的目标仍未实现。具体表现在该研究方法和模式存在盲目性大、分离分析操作繁琐，及单次实验得到的化合物单体样品量少，无法满足鉴定需要等弊端；甚至在研究过程中会发现一些中药、植物药经过提取分离、纯化后得到的单体成分没有对应药效活性，给质量控制分析带来错误导向。 1.1.2基于活性示踪的中药药效物质辨识模式 该模式是以药理活性为导向，对确定的活性成分进行分离、鉴定，确定中药的药效物质基础。与前一种分析模式相比，此模式更有利于获取有效成分或部位。此模式倡导从三个化学层次（中药整体、有效部位和有效成分）及四个药理水平(整体、组织、细胞和分子）辨识中药药效物质[9]，建立了大量用于中药药效物质辨识的模型，在新药研宄中发挥了积极作用。其中，基于经典的传统动物药理试验进行药物活性蹄选的方法，能全面、整体的反应药物的药效活性及毒、副作用。但试验需要大量的样品及实验动物，费用较高，因此对中药现代化研究具有一定的局限性。相比于整体动物实验，细胞、酶和受体等模型可研究范围广泛，造模简便，经济适用，有较好的应用前景。 ............................................... 第二章牛黄样品的收集与化学分析 2.1牛黄样品的收集 牛黄全年均可收集，其在全国各地均有分布，主产于华北、东北、西北地区。此外，湖北、四川、浙江、江苏、河南以及南美洲、非洲等地亦有生产。本文通过市场采购共收集了 10批天然牛黄及其代用品样品，将样品分为天然牛黄、人工牛黄、酶促牛黄三类，产地分布在我国的主要产区，详见表2.1。所有样品均经中国人民解放军第三0二医院全军中医药研究所所长肖小河研宄员鉴定。 ....................................... 2.2牛黄样品中胆汁酸成分的含量测定 胆酸是牛黄的重要活性身分之一[43],它是由游离型和联合型留体所构成的混淆物，此中，游离型胆汁酸重要有胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸，联合型胆酸重要有牛黄胆酸(钠)、甘氨胆酸(钠)等，常被作为牛黄的重要质控指标。胆汁酸类身分的含量测定要领文献报道较多的有薄层扫描法[44-49]、胶束动电毛细管电泳法和高效液相色谱法[53],此中高效液相色谱法敏捷度高，数据处置处罚方便，是较好的含量测定要领之一。但是，胆汁酸布局中缺乏共掘布局，无紫外吸取特性或紫外光谱吸取很弱，测定时无法直接利用HPLC的紫外检测器举行正确地含量测定。因此，在利用紫外或焚光检测时须对胆汁酸类身分举行衍生化[54]，或釆用其他范例的检测器，如蒸发光检测器（ELSD) [55，56]、质谱检测器（MS)等。此中质谱检测用具有埋头性，以及色谱别的检测器不具备地选择某一化合物的特性离子进行定量。因此，通常在进行单纯的色谱分析时，必须确保色谱峰的单一性，色谱谱峰中不得含其它干扰组分，而色质联用分析对这方面得要求不大高，较适合于复杂基质及微量分析，故选择质谱检测器（MS)。 .