抗体检测技术和类风湿因子课件.pptVIP

抗体检测技术;抗体检测技术 免疫酶技术 免疫荧光技术 凝集反应 沉淀反应 补体结合试验 放射免疫测定 蛋白印迹 免疫共沉淀 亲和力测定 ;凝集反应;沉淀反应;双向扩散法的操作：生理盐水配制1%-5%的琼脂，取4mL倒在显微镜用的载玻片上，凝固后打孔，中心孔滴入抗原，外周孔滴入抗体用于测定抗体效价，中心孔滴入抗体，外周孔滴入抗原，用于检测抗原的存在和定性抗原。 ;; 酶联免疫吸附测定实验 (ELISA) Enzyme linked immunosorbent assay ;实验原理;方法类型;;蠢哑智矢读纸垒癣慰丑炬钒疾诸脓族夜馆鲜觉仅帖痛昔塑陷股饶哆酬溜栓抗体检测技术和类风湿因子课件抗体检测技术和类风湿因子课件;;;一、试剂及仪器准备;⑵ 载体性能比较 要求：载体材料+、- 结果差别大 检测方法：10ug/L IgG包被,加酶标抗IgG，显色后，测20孔的OD，要求CV10% ⑶ 常用载体： 材料：聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯 等 形状：小试管、小珠、微量反应板 ;2. Ag或Ab：纯度高、效价高、结合力高 3. 免疫吸附剂(固相Ag或Ab)： 包被：将Ag或Ab固相化的过程 包被缓冲液 封闭：包被后在用1-5%小牛血清白蛋白再包被，以消除非特异吸附的干扰 ;㈡ 酶结合物： 1. 要求：纯度高、催化转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、标记后稳定 2. 常用酶：HRP、AP、?-半乳糖苷酶等 3. 底物： HRP可溶性底物及呈色： 邻苯二胺(OPD)：橙红(492nm)；四甲基联苯胺(TMB)：蓝色(450nm) 5-氨基水杨酸(5-ASA)：棕色(550nm) 鲁咪诺+H2O2：荧光 HRP不可溶性底物及呈色： DAB：棕黄色 α-萘酚：红色 3-氧基-9-乙基卡唑：红色 4-氯-1-萘酚：灰蓝色 AP可溶性底物及呈色： 对硝基苯磷酸酯(P-NPP)：黄色(405nm) 4-甲基伞基磷酸酯(4-MuP)：荧光 AP不可溶性底物及呈色： NBT和BCIP混合液：紫色 坚固红和萘酚ASMX混合液：红色 ?-半乳糖苷酶： 4-甲基伞基-?-半乳糖苷：荧光 ;4. 酶结合物的制备： 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法 ;（三）设备：酶标比色仪简称酶标仪 指测读ELISA光度计；针对固相载体形式的不同，各有特制的适用于板、珠和小试管的设计 性能指标：测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性 优良的酶标仪的读数一般可精确0.001，准确性为±1%，重复性达0.5% 操作：室温宜在15-30℃，使用前先预热仪器15-30min，测读结果更稳定。测读A值时，要选用产物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波长。有的酶标仪可用双波长式测读;砌扬柬劲蜒佳胜能华圃拜榆蝗膨涨碱茨惕暴姚钢攫扇次跋钙臣忽按朋恍橙抗体检测技术和类风湿因子课件抗体检测技术和类风湿因子课件;用途;WESTERN BLOT;;;;;;类风湿因子;类风湿因子;类风湿因子;类风湿因子;类风湿因子