草鱼(Ctenopharyngodon idellus)Sp1的克隆和其表达研究.pdfVIP

CLOININGANDEXPRESSION 0F TRANSCRIPTIONFACTORlFROM Sp cTENoPHARYNGoDoNIDELLUS ADissertationSubmittedto theGraduateSchoolofHenanNormal Univ，ersity inPartialFulfillmentofthe Requirement．s forthe ofMasterof andMolecular Degree Biochemistry Biology By Hao Guang Junli Supervisor：mj．ProfessorWang LiuZhen Adj．Professor May,2014 摘要 1)可调控多种基因的激活，参与多数细胞的生长分 转录因子Spl(Specificityprotein 化和细胞周期代谢，与肿瘤的发生密切相关。本研究利用T-A和RACE技术从草鱼 (Ctenopharyngodon 术检测了草鱼不同组织、不同发育时期印Jf基因的表达，并探讨了在日粮中添加不同蛋 白源、不同蛋白水平和谷氨酰胺二肽等营养素对草鱼印J基因表达的调控。 cDNA克隆及生物信息学分析 1、草鱼勋1 bp的编码区、5bp的5’UTR和426bp的 草鱼印J『cDNA全长为1914bp，包括1482 ．1．89。磷酸化位点：Ser21个，Thr 7个，Tyr2个。系统进化分析表NSpl在进化上比较 保守，与鲤科鱼中的斑马鱼(Danmrerio)亲缘关系最近，同源性达66％。 2、草_鱼spl基因的时空表达 采用RT-qPCR检测印J基因在草鱼心脏、肝胰脏、脾脏、肾脏、肌肉、垂体、鳃、 mRNA在草鱼中肠和鳃中表 脑、前肠、中肠和后肠等组织的表达差异。结果表明：印J7 mRNA相对 达最高，后肠和脑次之，其余较低；胚胎发育过程中，共检钡tJlO个时期印J 表达量，出膜前的表达量明显高于出膜后。出膜前各时期的表达量波动较大，原肠期和 器官期表达显著，囊胚期次之，出膜前期表达量降至最低，并在出膜后一直维持较低水 平，只在出膜期第3天有短暂上调。 3、外源蛋白对草鱼印j基因表达的影响 本实验以体重为11．55 4-0．4591拘健康草鱼为研究对象，探讨日粮中不同蛋白源和不 同蛋白水平对草鱼印J『基因表达的影响。在不同蛋白源实验中，分别采用鱼粉、豆粕和 鱼粉+豆粕作为饲料蛋白；在不同蛋白水平实验中，分别在饲料中添力H22％、27％、32％、