流式细胞术原理和应用课件.ppt

流式细胞术原理和应用;一 简介 二 构造及工作原理 三 FCM的数据分析 FCM的应用 实例;一 简 介;流式细胞仪的特点;举例：细胞周期分布检测 ;流路 (液流系统） 流动室 鞘液SHEATH 样本流SAMPLE 单细胞悬液5*105~1*106个/ml 光路（光学系统） 光源 滤片 电路（检测系统） 光电倍增管PMT 放大电路HV及GAIN 增益 A/D转换 统计 （分析系统） 计算机; 流动室是仪器核心部件，被测样品在此与激光相交。流动室由石英玻璃钢制成，并在石英玻璃中央开一个孔径为430μm×180μm的长方形孔，供细胞单个流过，检测区在该孔的中心，这种流动室的光学特性良好，流速较慢，因而细胞受照时间长，可收集的细胞信号光通量大，配上广角收集透镜，可获得很高的检测灵敏度和测量精度。;流动室; 激光光源：目前台式机FCM，大多采用氩离子气体激光器。激光(laser)是—种相干光源，它能提供单波长、高强度及稳定性高的光照，是细胞微弱荧光快速分析的理想光源。由于细胞快速流动，每个细胞经过光照区的时间仅为1μs左右，每个细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号强弱，与被照射的时间和激发光的强度有关，因此细胞需要足够的光照强度。 ;信 号;散射光信号 —— 细胞大小及颗粒性;光路 （滤片特性）;流式细胞仪光路图;电路 电压调节;电信号输入到放大器放大，放大器分两类：线性放大和对数放大。 细胞DNA含量、RNA含量等的测量一般选用线性放大测量。 在细胞膜表面抗原等的检测时，细胞膜表面抗原的分布有时要相差几十倍，甚至几万倍，通常使用对数放大器。 ;常用荧光染料介绍;光路补偿FITC/PE/ECD/PC5;三 FCM的数据分析;2. 双参数二维点图;3. 等高线图 4. 密度图;白血病免疫分型 HLA-B27: 强直性脊柱炎 淋巴细胞亚群 造血干细胞计数：造血干细胞移植 网织红细胞 PNH诊断（CD55、CD59） 血小板活化试验;细胞大小 细胞的颗粒度 细胞表面分子：CD 系列 细胞浆内分子：胞内细胞因子 细胞核内分子：P53 细胞功能检测：细胞周期、凋亡 ; 荧光信号的定量可以用 平均荧光强度（mean值），荧光信号面积（Area，A）来表示。;2）DNA Analysis;0;0;3） Apoptosis 检测;A） DNA片断化检测;B） Caspase-3活性的检测 ;C） Annexin V Assay;Annexin V Assay能够区分死亡与凋亡;D） TUNEL ;五 实例;细胞周期检测;爪帽掳倦太即驮朋爹份锤恶姓步梆鼠湿嘘育趴状这钳股眠奉直儒攒决揣向流式细胞术原理和应用课件流式细胞术原理和应用课件;A;蛋白表达的检测;凋亡检测(Annexin V/PI双染）;Thank you!