微生物与免疫实验汇报.ppt

微生物与免疫实验汇报;实验一 肠杆菌科细菌鉴定;实验原理 肠杆菌科细菌，尤其是埃希菌属，志贺菌属和沙门菌属的细菌，形态与染色性基本相同（都是G-短杆菌），在非选择性平板上的培养特征也难以区别。因此，鉴别它们时必须依靠生化反应特性、抗原特性与致病特性等鉴定实验。 ;实验方法 一 配制培养基 二 EMB平板划线分离培养 三 EMB表面确定可疑菌落 四 双糖铁琼脂斜面培养基和半固体培养基纯培养 （一）生化反应鉴定（葡萄糖，乳糖，麦芽糖，甘露醇，蔗糖，吲哚，甲基红，Vp，枸橼酸盐） （二）血清学鉴定 五 药物敏感试验;实验结果与讨论 （一）EMB平板划线 紫黑色，有金属光泽单菌落可初步鉴定大肠埃希菌菌落，粉红色或无色透明的单菌落可初步定为志贺菌或沙门菌菌落。 分析：产生酸性物质和伊红美蓝染料结合致使染料成紫黑色。 ;（二）双糖铁斜面培养基 ; 斜面红色而琼脂高层黄色（记为K/A），则此培养基接种的是志贺菌，可利用葡萄糖，不能利用乳糖。 分析：斜面葡萄糖含量少，只能产生少量有机酸，由于琼脂薄而极易挥发干净。 ; 若在K/A中还出现黑色沉淀，则此培养基中接种的是沙门菌。 分析：因为沙门菌能利用葡萄糖产生H2S，与培养基中的Fe2+结合生成FeS黑色沉淀。 ;（三）半固体培养基 （动力试验） 大肠埃希菌和沙门菌有沿接种针的插入位置向周围扩散的迹象，说明它们是有鞭毛，能运动，而志贺菌则只沿接种针插入位置生长，说明它无鞭毛，不能运动。 ;（四）生化反应鉴定 1.糖发酵实验 葡萄糖发酵：如右图，三种菌的培养基都由蓝变黄，所有杜氏小管都产生了气泡。 分析：只有大肠杆菌 能利用葡萄糖产气，另外两管可能混入大肠杆菌或产气杂菌。 ; 乳糖发酵：如右图，大肠杆菌 培养基颜色变黄，另两支依旧蓝色。另外，也只有大肠杆菌培养基中的杜氏小管产生气泡。 分析：只有大肠杆菌能利用乳糖产酸产气，达到预期。 ; 麦芽糖发酵：如右图，三只试管都由蓝变黄，并且都产生了气泡。 分析：大肠杆菌 利用麦芽糖产酸产气，沙门菌 只产酸，志贺菌 则是都不产。该现象可能是三种菌相互混杂或者受污染。; 甘露醇发酵：如右图，三支试管也是由蓝变黄，都出现气泡。 分析：三种菌均可利用甘露醇产酸，但其中只有大肠杆菌能利用它产气。另外两管出现气泡最有可能是混入大肠杆菌。 ; 蔗糖发酵：如右图，三支试管都是蓝色，都产生了少量气泡。 分析：三种菌都不可利用蔗糖产酸产气。因此少量气泡的出现可能是混入产气杂菌。 ;2.吲哚试验 如右图，蛋白胨水培养基培养过后加入吲哚试剂，发现大肠杆菌试管上层出现红色的游离带，其余两管上层则是黄色的游离带。 分析: 只有大肠杆菌可分解蛋白质中的色氨酸产生靛基质（吲哚）。达到预期。;3.甲基红试验 三支试管都变成了红色。 分析：甲基红指示剂PH小于4.4红色。三种菌都可利用葡萄糖产酸降低PH到4.4以下。达到预期。 ;4.伏一普试验（VP试验） 三支试管保持原色，无一变红。 分析：若生成红色化合物，反应阳性。 三种菌均不可发生此类生化反应，反应阴性。 ;5.枸橼酸盐利用试验 右图中，大肠杆菌培养基依旧绿色，沙门菌培养基完全变蓝，志贺菌培养菌则下层不变，斜面变蓝。 分析：枸橼酸钠为唯一碳源。利用可产生碱性物质，使指示剂绿色变深蓝色。三种菌都不可利用枸橼酸钠。右图现象可能混有杂菌。 ;; （五）血清学鉴定 玻片上的两滴混合液澄清，实验达不到预期。 分析：理论上会有一滴发生凝集反应，形成肉眼可见凝集块，另一滴则浑浊。 （如右图示