金针菇生活史各阶段核相探究.pdfVIP

分类号—— 密级 102141231 学校代码—— 学号201 金针菇生活史各阶段核相研究 onbehaviorofnucleiindifferent Study oflife ofFlammulina stages cycle velutipes 指导教师姓名、职称 堂±到鏊撞 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一四年四月 摘 要 金针菇Flammulina 膨瑚菌科、小火焰菌属的一种真菌，是一种在全球均广受欢迎的著名 的食药用真菌。到目前为止，关于金针菇的一系列生物学特性的研究 及其食药用价值在国内外均有相关的研究，但关于金针菇整个详细生 活史的报道研究相对较少。本论文对金针菇生活史各阶段的核相及出 菇机理进行了较为全面的研究，主要内容及结果如下： 1．金针菇生活史各阶段的人工培养 本实验通过进一步的研究改良并优化了最适宜金针菇栽培的条 件，同时观察了其生活史各个不同阶段的生长发育情况，观察不同菌 株子实体产生孢子的情况，并且收集不同菌株的孢子进行萌发交配实 验。实验结果得出：金针菇的菌丝在形成初期均为白色，但随着菌丝 的不断繁殖生长，不同菌株的菌丝表面会分泌出黄褐色的色素；发育 成熟的异核体菌丝及部分同核体菌丝可扭结产生原基，继而发育成为 子实体。实验结果表明异核子实体能产生担孢子，担孢子可以萌发， 发育为菌丝体；少数同核体菌丝也可以产生子实体，但子实体呈畸形， 后期不产生孢子。 2．金针菇生活史各阶段的形态解剖学观察 取金针菇的菌丝体、子实体和担孢子，制作临时装片，用刚果红 溶液染色，普通光学显微镜下观察，结果表明：金针菇同核体菌株均 无锁状联合，子实体担子上不产生担子小梗，不产生孢子；两不同极 性的单核菌丝进行交配形成次级菌丝，有明显的锁状联合，形成的子 T 实体的担子上含有4个担子小梗，最后担孢子从小梗上脱落。单核菌 丝和双核菌丝都能产生粉孢子。 对金针菇生活史各阶段的菌丝体、子实体、担孢子等进行荧光显 微观察研究。结果表明：金针菇单个担孢子发育而来的同核体菌丝为 单核，无锁状联合，部分单孢菌株能形成同核子实体，同核子实体的 原担子中只有1个核，该核在担子中进行一次有丝分裂形成纵向排列 的2个子核，担子发育停止，同核子实体不产生担孢子；具有可亲和 交配型的单孢菌丝经过质配形成异核体菌丝，异核体菌丝双核，具有 锁状联合，能形成异核子实体，异核子实体的原担子中具有2个核， 这2个核经过核配融合为1个二倍核，二倍核在担子中进行减数分裂 形成4个单倍子核，4个子核分别进入4个担孢子中，随着担孢子继 续发育，其中的单核再进行一次有丝分裂，成熟担孢子为双核，但这 2个核是同质的。由单核菌丝和双核菌丝产生的粉孢子为单核。 3．SNPs单核苷酸多态性在金针菇生活史研究中的应用 本实验通过构建金针菇基因组文库，设计了17对引物，并分析 得到了117个SNPs位点。并用这17对引物对不同采集地及不同生长 发育时期的金针菇样品进行PCR扩增并测序。SNPs分子标记对金针 菇生活史各阶段的核相进行了分子检测。分子标记还证实单核体菌株 在栽培出菇的过程中可能会被其它菌株的粉孢子或担孢子污染而变 成异核体菌株。 根据以上研究结果，我们构建了完整的金针菇生活史：双核孢子 萌发形成单核初生菌丝，少数初生菌丝能出菇形成同核子实体，同核 II 子实体担子为双核，不产生担子小梗，不产生孢子；两个不同极性的 初生菌丝交配形成次生菌丝，次生菌丝形成异核子实体，子实体担子 含有4个担子小梗，最后孢子从小梗上脱落。单核菌丝和双核菌丝均 能产生具有单核的粉孢子。 关键词：金针菇，同核体，异核体，分子标记，荧光染色观察