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核磁共振波谱学简介 在结构生物学上的应用 吴 季 辉* 第一部分 什么是核磁共振 核磁共振能提供什么信息 核磁共振技术的特点 核磁共振现象 核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance，简写为NMR），是指核磁矩不为零的核，在外磁场的作用下，核自旋能级发生塞曼分裂（Zeeman Splitting），共振吸收某一特定频率的射频（radio frequency 简写为rf或RF）辐射的物理过程。 几种核的性质 核磁矩与磁场的相互作用 核磁能级间的跃迁 核磁信号 矢量模型 在核磁共振的经典模型中，我们把每一个核磁矩看成是一个刚性矢量 核磁矩在外磁场中的进动 热平衡时的磁化矢量 旋转坐标系 矢量模型下的核磁共振 射频脉冲 弛豫 自旋－晶格弛豫过程: 核自旋系统与周围晶格交换能量,使各能级上的布居数恢复到热平衡状态 自旋－自旋弛豫过程: 等同核自旋系统内部各自旋之间交换能量,影响谱线线宽 Bloch方程 单位体积内核磁矩的矢量和称为磁化向量M 此处R称为弛豫矩阵 T1为纵向弛豫时间 T2为横向弛豫时间 核磁信号 FID经过Fourier变换得到核磁图谱 密度算符 密度算符的演化 热平衡态下的密度算符 如果H不显含时间 化学位移 同一种核在分子中不同化学环境下共振频率的位移称为化学位移 化学位移的起因 屏蔽磁场的形成 1H谱化学位移的分布 自旋耦合 两个邻近的成键的自旋间具有自旋耦合，即J耦合，这种相互作用通过成键电子对传递 自旋耦合造成的能级和谱线分裂 无耦合 有耦合 自旋耦合作用下的演化 Karplus关系式 三键耦合常数3J的大小是二面角?的函数 核磁共振波谱学 NOE NOE(Nuclear Overhauser Effect)指的是一个跃迁被扰动(饱和)时，另一个跃迁的强度发生改变这样一个效应 产生NOE的相互作用是两核之间的偶极耦合 ，这种偶极相互作用的强度与核间距离的6次方成反比 动态NMR 核磁共振可以检测包括化学反应 ，构象变化等动力学过程 确定运动相关时间?c的NMR方法 分子内运动 现有谱仪的磁场强度下主要是偶极弛豫起作用 蛋白质的1H谱 二维NMR 比列时的Jeener于1971年提出二维NMR的思想 瑞士的Ernst对二维NMR进行了深入研究，于1976年用量子统计的系综理论对二维NMR原理进行详尽的理论阐述，1983年又提出乘积算符理论，大大简化了脉冲序列的分析。由于在PFT-NMR及2DNMR二方面的贡献而获得1991年诺贝尔化学奖 瑞士的Wüthrich首先将2D-NMR的方法用于蛋白质，发展了将2D-NMR和距离几何结合得到蛋白质在溶液中的空间结构的方法 ，第一个用NMR方法解析出蛋白质的空间结构。获得2002年诺贝尔化学奖 二维核磁共振波谱的基本思想 二维NMR实验在时间域上可分为四个时期 2D-FID 记录的是时间域的二维信号S(t1,t2)，经二维Fourier 变换即得频率域的二维核磁共振谱S(?1,?2) 二维核磁共振波谱的特点 引入另一个频率变量，使原来拥挤在一个线段上的密集谱线，可以分散在一个平面上，提高图谱的分辨率 S(?1, ?2)并不是S(?1)和S(?2)的简单叠加，其交叉峰包含了比一维谱丰富得多的信息 实验方法灵活多样 ，被称为“自旋工程” (Spin engineering) 可以间接检测到在普通一维NMR实验中检测不到的跃迁，如多量子跃迁 堆积图方式表示的二维谱 等高线图方式表示的二维谱 蛋白质研究中常用的二维谱 同核化学位移相关谱（COSY） 双量子滤波COSY （DQF-COSY ） 全相关谱 （TOCSY ） 核欧沃豪斯效应增强谱（NOESY，ROESY ） 异核化学位移相关谱 （HMQC ，HSQC） 相敏COSY 相位循环： ?1＝0 2 2 0 1 3 3 1 ?2＝0 2 0 2 1 3 1 3 ?R＝0 2 2 0 1 3 3 1 乙醇CH3CH2OH的COSY谱 COSY谱（不考虑其精细结构） (a)一个三自旋体系AMX ; (b)两个三自旋体系AMX、A?M?X? 同核Relay相关谱 (a)AMX体系，(b)AMX和AMX体系 相敏COSY谱交叉峰的精细结构 A、交叉截面 B、交叉峰的等高线图 C、自旋-耦合 TOCSY 相位循环： ?1＝0 2 2 0 1 3 3 1 ?2＝0 2 0 2 1 3 1 3 ?R＝0 2 2 0 1 3 3 1 NOESY 相位循环： ?1＝ 0 2 0 2 0 2 0 2 0 2