F18大肠杆菌黏附素受体结合域鉴定新方法.pdf

第 31卷第 2期 扬州大学学报 (农业与生命科学版) Vo1．31No．2 2O10年 6月 JournalofYangzhouUniversity (AgriculturalandLifeScienceEdition) Jun．2o10 F18大肠杆菌黏附素受体结合域鉴定新方法 葛兆宏 ，陆广富 ，朱 军 ，郁 磊。，羊 扬 ，原志伟 ， 朱 吕昌 ，吴圣龙 ，包文斌 ，朱 国强。 (1．江苏畜牧兽 医职业技术学 院，江苏 泰州 225300；2．扬 州大学 兽 医学院 ，江苏 扬 州 225009； 3．中华 人民共 和国荣成 出入境检验检疫局 ，山东 荣成 264300；4．扬州大学 动物科学 与技术学 院，江苏 扬 州 225009) 摘 要：运用 DNA 重组技术将 F18ab和 F18ae大肠杆菌黏 附素 fedF亚单位 内的第 6O～109位氨基酸残基 区段 (fedF1)和 fedF全基 因克隆入 V型分泌系统 MisL的载客结构域上 ，经 DNA测序确证其正确 阅读框后 ，含重组菌质 粒 pnirBMisI一fedF或 pnirBMisL—fedF1经厌氧诱导后 ，与断奶仔猪小肠上皮细胞进行体外黏 附试验 。结果表 明：FUT1 基 因M307位点 中GG型和AG型仔猪小肠上皮细胞均能黏附上述重组菌 ，而 AA 型个体小肠上皮细胞则不能黏附。上 述重组菌均能与兔抗 F18ab菌毛 FedF亚单位单 因子高免血清发生玻板凝集反应 。而 FedF突变体 FedF(M)的重组质 粒菌则失去上述凝集和黏附特性 。证 明F18大肠杆菌黏 附素 F基 因及其基 因片段 F1在大肠杆菌表面得到 了功 能性表达 ，F18ab和 F18ac黏附素 FedF直接介导 F18大肠杆菌与 易感仔猪小肠上皮细胞表面大分子受体黏 附结合 ， fedF1为黏附素 FedF的受体主要结合域 ，其 His88、His99是 FedF黏附素受体结合域 的重要氨基酸残基。 关键词 ：F18大肠杆菌 ；黏 附素 FedF；V型分泌系统 ；自主转运蛋 白；受体结合域 中国分类号 ：S852．61 2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671～4652(2010)02—0001—05 A novelidentificationmethodofthereceptor-bindingdomain for FedF from pathogenicF18fimbrialEscherichiacoli GE Zhao-hong～，LU Guang—fu～，ZHU Jun ，YU Lei，YANG Yang ，YUAN Zhi—wei～， ZHU Lii—chang ，W U Sheng—long ，BAo W en—bin ，ZHU Guo-qiang (1．JiangsuAnim SciandV MedColl，Taizhou225300，China； 2．Coll0／VetMed，YangzhouUniv，Yangzhou225009，China； 3．RongchengEntryExitInspandQuarBurofChina，Rongcheng264300，China； 4．CollofAnim SciandT8f^，ynngzhouUniv，Yangzhou225009，China．) ABSTRACT：UsingtheDNA manipulation．thediferentrecombinantsofpnirB M isL from thetypeV secretion system MisLwithDNA insertsof dFl(betweenaminoacidresidues60to1O9of F)，fedF(M ) (boththepositions88 and89 aminoacidresidueschangedfrom HistidinetoAlamine)orfedFfrom bothF18abandF18acfimbrialE．col were constructed，respectively．AfterinducingofIPTG attheanaerobiccondition，theabovere