第三章离心分离.ppt

第三章 离心分离(centrifugation) 对于浓度较小，粒径较大，硬度较强的不溶物，可以采用过滤分离。 但当固体颗粒细小而难以过滤时，发酵液不易被过滤纯化，离心操作往显得十分有效。 离心分离是基于固体颗粒和周围液体密度存在差异，在离心场中使不同密度的固体颗粒加速沉降的分离过程。 动植物细胞的收集、细胞碎片和沉淀的分离等常用离心分离。 离心分离 优点： 分离速度快，分离效率高、液相澄清度好； 缺点： 与过滤设备相比，设备投资高、能耗大、离心产生的固体浓缩物和过滤产生的浓缩不同。 通常情况下离心只能得到一种较为浓缩的悬浮液或浆体；而过滤可获得的水分含量较低的滤饼。 离心分离 利用惯性离心力和物质的沉降系数或浮力密度的不同而进行的分离、浓缩或提炼操作。 分类 离心沉降 利用固液两相的密度差，在离心机无孔转鼓或管子中进行的悬浮液的分离； 离心过滤 利用离心力并通过过滤介质，在有孔转鼓离心机中分离悬浮液的操作； 离心分离和超离心 利用不同溶质颗粒在液体中各部分分布的差异，分离不同相对密度液体的操作。 主要内容 离心沉降 离心过滤 离心机的选用 离心机在生物工业中的应用 超离心法 3.1 离心沉降 3.1.1 原理 原理 浮力Fg＝(ρs-ρ)gV=[π/6d3(ρs-ρ)] g d:粒子直径； ρs和ρ分别为粒子和流体的密度； Stockes定律，粘滞力Ff＝3πdμu＝1/2CDA ρ u2 μ：流体粘度；u：粒子的运动速度；CD：阻滞系数；A：粒子在运动方向的投影面积； CD＝f(Re) Re=du ρ / μ Re1 CD=24/Re 1Re104 CD=24/Re +3/Re0.5+0.34 对于生化溶质，一般满足Re1的要求。 Ff=CD(1/2 ρ u2)(1/4 π d2)=24/Re (1/2 ρ u2)(1/4 π d2) 当粒子匀速沉降时，Fg＝Ff；u=d2/(18 μ)(ρs-ρ)g 3.1.1 原理 若粒子在离心力场中沉降 则 u=d2/(18 μ)(ρs-ρ) ω2r 离心分离因数 Fr = ω2r/g； 常速离心机Fr 3000; 中速离心机3000 Fr 50000，用于细胞、菌体和培养基残渣等分离； 高速离心机50000 Fr ，用于细胞碎片、较大细胞器、大分子沉淀物等分离； 超速离心机 2×104~106，用于DNA、RNA蛋白质、细胞器、病毒分离纯化；检测纯度；沉降系数和相对分子量测定等。 3.1.2 离心沉降设备 沉降式离心机包括： 瓶式离心机和工业用无孔转鼓离心机 按离心机的作用方式分类 1）斜角式离心机 结构稳定， 可装载较多的样品 使用较高的转速。 加速或减速时，对样品有搅动。 有些梯度离心要求用角转头，否则形成的梯度不均一，线性很差． 平抛式离心机转子 ３）管式离心机 （tubular-bowl centrifuge） 管式离心机具有一个细长而高速旋转的转鼓， 转鼓内装有纵向平板， 其下部有进料口。上部两侧有重液相和轻液相出口。 管式离心机 待处理的物料在一定压力（3×104 Pa左右）下由进料管经底部空心轴进入鼓内， 靠挡板分布于鼓的四周，并使料液迅速达到与转鼓相同的角速度。 转鼓带动物料高速旋转，在离心力下，悬浮液沿转鼓内壁向上流动的，料液在离心力场的作用下因其密度差的存在而分离。 澄清后的液相流动到转鼓上部的排液口排出。 比重大的固体微粒逐渐沉积在转鼓内壁形成 沉渣层，达到一定数量后，停机人工清除。 管式离心机特点： 结构简单， 可提供较大离心力，转速高，分离因数高达15000-65000。 管状离心机可以冷却，有利蛋白质分离 间歇操作，须定时拆卸、清洗 适用于于分离乳浊液及含细颗粒的稀悬浮液，适用于固含量低于1%，颗粒度小于5微米，黏度大的悬浮液澄清或固液两相密度差较小的分离。 4）碟片式离心机disk-bowl centrifuge 是在管式离心机的基础上发展起来的，在转鼓中加入了许多重迭的碟片，缩短了颗粒的沉降距离，提高了分离效率。 是生物工业中应用最为广泛的一种离心机 有一个密封的转鼓，内装十至上百个锥顶角为60~100゜锥形碟片。 碟片间的距离一般为0.5-2.5mm, 碟片式离心机工作原理 当悬浮液在动压头的作用下，经中心管流入高速旋转的碟片之间的间隙时，便产生了惯性离心力， 其中密度较大的固体颗粒在离心力作用下向上层碟片的下表面运动，而后在离心力作用下被向外甩出，沿碟片下表面向转子外围下滑， 而液体则由于密度小，在后续液体的推动下沿着碟片的隙道向转子中心流动，然后沿中心轴上升，从套管中排出，达到分离的目的 碟片式离心机类型 人工排渣的