生物化学讲义第九章基因信息的传递.docVIP

第九章 基因信息的传递 【目的和要求】 1. 掌握DNA的复制的定义及特征。 2．熟悉参与DNA复制的酶及DNA复制过程。 3．掌握引发DNA损伤 1．DNA复制的特征（1）半保留复制（2）半不连续复制 （3）有特定的起始点（4）双向复制 2．参与DNA复制的物质 （1）模板：DNA的两股链。 （2）底物：四种dNTP（即dATP、dTTP、dCTP、dGTP）。 （3）引物：RNA.。 （4）DNA聚合酶：真核生物有五种：DNA聚合酶α、β、γ、δ、ε； 原核生物的DNA聚合酶有：polⅠ、polⅡ、polⅢ三类。 原核生物DNA聚合酶性质和功能比较 polⅠ polⅡ polⅢ 分子量 109000 120000 400000 5′→3′聚合作用 ＋ ＋ ＋ 3′→5′核酸外切酶作用 ＋ ＋ ＋ 5′→3′核酸外切酶作用 ＋ － ＋ 主要功能 校读、填补空隙 ？ 复制酶 切除引物 （5）引物酶：一种RNA聚合酶。能以DNA为模板，识别DNA复制的起始点，催化一段引物RNA的合成。引物以氢键与模板结合。 （6）解链和解旋酶类： ①拓扑异构酶：有内切酶、连接酶功能，分为酶Ⅰ、酶Ⅱ。 酶Ⅰ又称ω蛋白 可切开一股链，不需消耗ATP。 酶Ⅱ又称旋转酶 在消耗ATP的作用下，可切断双链，且分开双链。 ②解链酶解开一个碱基对，消耗2个分子ATP。作用在复制叉处，可沿模板随复制叉伸展（5′→3′）而移动。 ③单链结合蛋白（SSB） 稳定解开的单链DNA，阻止复性和保护单链部分不被核酸酶水解。 （7）DNA连接酶催化以氢键结合于模板DNA的两个DNA片段通过磷酸二酯键连接起来。在DNA复制、修复和基因工程中起作用。 参加DNA复制酶的主要作用 作 用 分 子 量（万） 引物酶 合成RNA引物 6 解链酶 解开DNA双链 6.5 SSB 稳定已解开的单链 7.4 拓扑酶Ⅱ 克服解链中的打结缠绕 40 拓扑转型 拓扑酶Ⅰ 切断DNA中的一股链，在解旋中不致打 ―― 结，又可封闭切口，使DNA变为松弛态。 polⅢ 真正的‘复制酶’ 55 polⅠ 填补引物遗留空隙 10.9 DNA连接酶 连接5′－P和3′－OH末端 7.4 3．复制的过程 （1）复制的起始 ①拓扑异构酶将正超螺旋转变为负超螺旋；解链酶消耗ATP将氢键打断把DNA由双链变为单链。 ②SSB与单链DNA结合，起稳定单链避免核酸酶水解的作用。 ③引物酶以解开的DNA单链为模板，以dNTP为原料，按5′→3′方向催化引物RNA的生成（十几个～数十个核苷酸链等）。随从链不连续，需多次合成引物。 （2）复制的延长 ①在polⅠ催化下，以四种dNTP原料3′-OH端开始，沿5′→3′方向逐个加入脱氧核苷酸，使DNA链得以延长。DNA 的两股单链：一条链的方向与解链方向相同，子链DNA可沿5′→3′方向前导链；而终止在DNA合成的片段内，由DNA聚合酶I外切酶活性切除RNA引物，致使各片段之间形成空隙，然后由DNA聚合酶I的聚合酶活性催化填补空隙，最后由DNA连接酶将这些片段再连接起来，成为一