阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物诱导人内皮细胞表达MCP-1mRNA影响及其机制的的研究.pdfVIP

阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物诱导人内皮细胞表达 MCP-1 mRNA 的影响及其机制研究 中 文 摘 要 [ 目的] 观察阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物（AGEs ）诱导的体外培养人脐静 脉内皮细胞（HUVECs ）表达单核细胞趋化蛋白-1 （MCP-1 ）mRNA 的影响， 并探讨过氧化物酶体增殖物激活受体 γ （PPAR-γ）和核因子-κB （NF-κB ）在阿 托伐他汀抗炎效应中的作用。 [方法] 1 胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞，取第 3 至 5 代细胞用于实验。 2 倒置相差显微镜形态观察法及免疫细胞化学染色法鉴定人脐静脉内皮细胞。 3 实验分组：①空白对照组；②牛血清白蛋白（BSA ）组：用于与 AGEs -4 -1 （AGE-BSA ）组对照；③AGEs 组：不同作用浓度的 AGEs （10 -10 mg/ml ） 与细胞共同孵育 24 小时；④阿托伐他汀组：不同作用浓度的阿托伐他汀 -1 （0.1、1、10μmol/L ）分别与细胞孵育 1 小时后，加入 AGEs （10 mg/ml ） (根据③实验结果选取最佳浓度)与细胞共孵育 24 小时；⑤15d-PGJ2（PPAR-γ 激动剂）组：15d-PGJ2 （10μmol/L ）与细胞孵育 1 小时后，加入 AGEs -1mg/ml ）与细胞共孵育24 小时；⑥GW9662（PPAR-γ抑制剂）组：GW9662 （10 -1 （5000nmol/L ）与细胞孵育 1 小时后，加入 AGEs （10 mg/ml ）和阿托伐他 汀（1μmol/L ）（根据④实验结果选取最佳浓度）与细胞共孵育24 小时。 4 逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR ）法检测细胞MCP-1 和 PPAR-γ mRNA 表 达水平。 5 蛋白免疫印记法（Western-blot ）测细胞核内NF-κB p65 水平。 [结果] 1 倒置相差显微镜下可见培养的细胞呈卵圆形或多角形，典型的铺路石样排 列。经 CD31 、CD34 染色，细胞胞浆内有棕黄色颗粒沉着（CD31 、CD34 阳性）。 -4 -1 2 AGEs （10 -10 mg/ml ）呈浓度依赖性促进人内皮细胞MCP-1 mRNA 表达， 4 -4 分别是空白对照组的 1.53 倍、2.12 倍、2.56 倍、4.71 倍；AGEs 浓度为 10 mg/ml 时，细胞 MCP-1 mRNA 表达水平即明显增高（0.26±0.02 vs 0.17±0.04 ， P0.01 ）。 3 与 AGEs 组比较，阿托伐他汀（0.1、1、10μmol/L ）呈浓度依赖性抑制细胞 MCP-1 mRNA 表达；阿托伐他汀浓度为 1μmol/L 时，细胞MCP-1 mRNA 表 达水平显著降低（0.63±0.11 vs 1.03±0.07，P0.01 ）。 4 与空白对照组相比，AGEs 组人内皮细胞 PPAR-γ mRNA 表达水平明显降低 （0.22±0.08 vs 0.69±0.09 ，P0.01 ），细胞核内 NF-κB p65 水平显著升高 （0.78±0.06 vs 0.31±0.01，P0.01