通用引物多重PCR技术检测3种病原微生物.pdfVIP

※分析检测 食 晶 科 学 2011，Vo1．32，No．10 103 通用引物多重PCR技术检测3种病原微生物 商 颖 1，许文涛．．2，元延芳2，梁志宏2，石 慧1，翟志芳1，张雅楠2，罗云波 2，黄 昆仑 1．22I (1．中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083； 2．农业部转基因生物食用安全监督检验测试中心(北京)，北京 100083) 摘 要：为寻找快速且准确的病原微生物检测方法，在普通多重PCR(polymerasechainreaction)技术的基础上研究一 种新的通用引物多重PCR(universalprimers．multiplexPCR，UP．M．PCR)技术。利用该技术对食品中主要的3种致 病菌——大肠杆菌、单增李斯特菌和沙门氏菌进行同时检测，经过单重PCR验证、二重 以及三重UP—PCR反应条 件和体系优化。结果表明，该方法的最低检测限为0．5pg目标DNA，复合引物和通用引物的加入量分别为2nmol／L 和 300nmol／L。此方法检测灵敏度高、病原菌检测限低 ，可在实践中应用 。 关键词 ：大肠杆菌；单增李斯特菌；沙门氏菌；通用引物；多重PCR EmployingUniversalPrimers—MultiplePCRtoDetectThreePathogenicMicroorganisms SHANG Ying，XU W en—tao ·，YUAN Yan·fang。，LIANG Zhi—hong ，SHIHui，ZHAIZhi—fang，ZHANG Ya—nan， LU0 Yun—bo1一，HUANG Kun—lun12·， (1．CollegeofFoodScienceandNutritionalEngineering，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing 100083，China； 2．Supervision，InspectionTestingCenterofGeneticallyModifiedFoodS~eyt，MinistryofAgriculture，Beijing 100083，China) Abstract：Afast，accuratenadnoveluniversalprimers—multiplexPCR (UP-M-PCR)methodwasdevelopedtodetectthree commonpahtogenicmicroorganismsinfoodmatricessimultaneously：Escherichiacoli，ListeriamonocytogenesnadSalmonella spp．Thespceificityofhteconstructedcomplexprimerswasverifiedbysin e—PCR，andtheduplexnadtriplex—PCRreaction systemsnadconditionswereoptimizde ．Th edevelopde mehtodhadalimi tofdetectionofO．5PgtargetDNA．Th eadditionsof htecomplexspecificprimersanduniversalprimerswere2nmol／Lnad300nmol／L，respectively．ThenewUP—M—PCRmethod hashteadvnatagesofhighsensitivitynadlow detectionlimi tna dcanhtusbeapplide inpractice． Keywords：Escherichiacoli；Listeriamonocytogenes；Salmonellaspp．；universalprimer；multiplexPCR (polymerase chainreaction) 中图分类 号：Q789；R446．5 文献标识码：A 文章编号：1002．6630