三种方法测定消癌平注射液中吐温80含量的试验方案1.docVIP

编号： 三种方法测定消癌平注射液中 吐温80含量的试验方案 起 草 人: 日期 年 月 日 审 核 人： 日期 年 月 日 批 准 人： 日期 年 月 日 目 录 一、试验背景 1 二、试验依据 1 三、试验设计及组织 1 四、试验参加人员及职责 1 五、试验目的 1 六、试验内容 1 1. 试验用材料 1 2. 试验仪器及设备 1 3. 试验过程 2 七、试验结果 2 一、试验背景： 消癌平注射液是一种广谱抗癌药物，不论是单独用于抗癌治疗还是联合放化疗都有较好的疗效，其处方是通关藤浸膏和吐温80，其中通关藤浸膏是主药，吐温80为药用辅料，做增溶剂用，能够改善注射剂的澄明度，有文献记载中药注射液中吐温80的用量一般为0.02%～2%，本品不能盲目使用，高纯度的吐温80近无色，但一般市售的多为浅黄色，其间含有较多杂质，医学界证实，含吐温80的注射剂可能会引起过敏反应，有研究表明这些不良反应并非吐温80造成，而是吐温80中的杂质造成的，所以其杂质不彻底去除，单靠增加用量难以达到药用目的，不仅起不到很好的增溶效果，甚至会影响药物的吸收。其次吐温80因加热及贮藏会造成PH值下降，可使溶液变浊，起不到很好的增溶效果，这就要求我们要对吐温80的质量探究，以明确其用量，本实验首先建立消癌平注射液中吐温80含量的测定方法。 试验依据： 根据查阅有关文献，目前有三种方法来测定消癌平注射液中吐温80的含量，分别是用液相和比色法，其中液相测定方法包括两种子方法。 三、试验设计及组织： 1.本次试验选取三批消癌平注射液（加入已知量的吐温80），利用三种方法测定注射液中吐温80的含量，测出的含量与已知加入量做对比，筛选出专属性强、准确度高的试验方案。 2.根据1中筛选出的方法，建立消癌平注射液中吐温80含量测定的标准方案。 四、试验参加人员及职责： 1.消癌平攻关项目组分析人员负责试验方案及报告的起草工作。 2.消癌平攻关项目组分析负责人负责试验方案及报告的审核、检验和监督等工作。 3.消癌平攻关项目组副组长负责试验方案及报告的审核批准。 五、试验目的： 筛选出专属性强，准确度高的试验方案，建立消癌平注射液中吐温80含量测定的标准方案。 六、试验内容： 方法一. HPLC-ELSD法测定消癌平注射液中吐温80的含量 1.1 仪器设备 高效液相色谱仪Waters HPLC system(e2695-Empower2)，Alltech ELSD 2000检测器，微量注射器，容量瓶，移液管，胶头滴管，电子天平 1.2 试剂药品 聚山梨酯80 对照品( 符合欧洲药典标准，Sigma-Aldrich Chemie GmbH，批号：1390440 5170P01 ，纯度：100%) ；消癌平注射液样品，乙酸铵，乙腈（色谱纯），无水乙醇试剂（分析纯），氮气，蒸馏水 1.3 色谱条件: 色谱柱：TSK-GEL G2000 SWXL 柱(7.8 mm ×300 mm ，5 μm )；流动相：20 mmol·L-1乙酸铵-乙腈(90∶10)，柱温：30℃，流速：0.6mL·min-1； ELSD条件：漂移管温度103℃，氮气流速2.3 L·min? 1；进样量：10 μ L 。在此条件下样品中的聚山梨酯80与其他组分能达到基线分离 1.4 试验过程 1.4.1 对照品溶液的制备 精密称取聚山梨酯80对照品300. 0mg （加无水乙醇制成3.0 mg·mL-1的对照品溶液）置100 mL棕色量瓶中，加入无水乙醇溶解并稀释至刻度，即得。 1.4.2 供试品溶液的制备 精密量取消癌平注射液1.0 mL 至100 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，离心取上清液，即得。 1.4.3 方法学考察： 1.4.3.1线性关系考察：精密量取对照品溶液 0、2、4、6、8、10、12ml到25ml容量瓶中，分别移取10μL注入色谱仪，按上述色谱条件测定，以聚山梨酯80进样量的常用对数值(X ，ng)为横坐标，峰面积的常