提高仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗抗原单位的试验.doc

提高仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗抗原单位的试验 尹尧 ，礼颖 （哈药集团生物疫苗有限公司，黑龙江哈尔滨 150069）? [摘要] 为了提高仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗抗原单位，在生产中进行了一些试验，对此进行分析、总结。 [关键词] 仔猪大肠杆菌；抗原单位 仔猪大肠杆菌病病原为产肠毒素大肠杆菌，该菌致病力主要由粘附素性菌毛和肠毒素两类毒力因子构成，主要危害一周龄内的初仔猪。仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗分别带有K88、K99、987P纤毛抗原的大肠埃希氏菌，接种于适宜培养基培养，将培养物经甲醛溶液灭活后，加氢氧化铝胶制成。用于预防由大肠杆菌引起的新生仔猪腹泻病（即仔猪黄痢）[2]。 本品生产用三个菌种，半成品检验用三个菌种，菌种繁多，生产繁琐，工艺复杂，因此生产高质量的产品需要克服很多困难。 1 提高菌种的抗原性 1.1 菌种标准 1.1.1 形态和生化特性 菌株应具有大肠埃希氏菌的典型形态和生化特性。为革兰氏阴性无芽孢的直杆菌，大小0.4-0.7um×2-3um，两端钝圆，散在。本菌为需氧菌，在普通培养基上生长良好，最适生长温度为37℃，最适生长pH为7.2-7.4。 1.1.2 培养特性 接种适宜改良Minca琼脂平板上，在36-37℃培养20小时，菌落光滑圆整。在改良Minca汤中，36-37℃培养20小时，呈均匀混浊，用相应的K88、K99、987P因子血清做平板凝集反应，应达到强阳性反应。 1.1.3 血清学特性 用O抗原定型血清和K88、K99、987P因子血清对菌株进行血清型鉴定，均应符合菌株的抗原结构。C83549为O149：K88ac、C83644为O68：K99、C83710为O9：987P、C83902为O8：K88ac、C83912为O-：K99、C83917为O9：987P。 1.2 菌种的选择 1.2.1 一级菌种的选择 用低倍镜选取光滑圆整单个菌落，然后做凝集试验，达到++++单个菌落，作为一级菌种。 1.2.2 二级菌种的选择 一级菌种划斜面进行培养，将斜面做凝集试验，达到++++的作为二级菌种备用。 1.2.3 三级菌种的选择 将凝集达到++++的二级菌种接入用改良Minca汤中，振荡培养，培养结束做凝集试验，达到++++的作为三级菌种备用。 2 提高菌液培养的抗原性 2.1培养温度的选择 由于我们培养的需要的是纤毛，纤毛必须在37℃、需氧培养时才产生或表达，而18℃则不产生。因此培养温度我们控制在37℃，上下幅度不超过0.2℃ 。 2.2 搅拌转速的选择 由于我们培养的需要的是纤毛，大肠杆菌极易生长，但是纤毛不易产生或表达，如果我们增加搅拌速度，纤毛产生或表达时同时在脱落，然后由新的纤毛产生或表达，提高了菌液的抗原性。 2.3 原材料的选择 在生产过程发现，同样的原材料不同的产地，有不同的凝集效果。例如：在C83902菌种的培养时候发现，用不同产地的琼脂，有产生自凝现象发生，作为一个检验用菌种，是严格要求不允许有自凝现象产生的。 2.4 通气量的选择 大肠菌在培养初期由于细菌数量较少并且尚未适应培养环境，细菌几乎不增殖，因而耗氧量较少，通气量可以适当小一点。随着发酵时间的增加，发酵液中的细菌逐渐增多，代谢增强，耗氧量增加，需要加大通气量以提高溶氧量，满足细菌对氧气的需求。esearch of Increasing the Yield Antigen unit of Escherichia Co1i Trivalent Vaccine for Piglets，Inactivated YIN Yao (Harbin Pharmaceutical Group Bio-vaccines Co.,Ltd. ，Heilongjiang 150069；China) Abstract: In orade to increasing the yield antigen unit of Escherichia Co1i Trivalent Vaccine for Piglets，Inactivated ，experimenta were made in the production . anything and summary were also put forward at last. Key Words: E.lico ； Antigen unit 个人简介：尹尧 （1982年-） 黑龙江畜牧兽医 2011年04期