人3型腺病毒GZ13株的分离鉴定及六邻体蛋白的分子进化研究.pdfVIP

· l198 · 广东医学 2012年 5月 第33卷第 9期 GuangdongMedicalJournal May．2012，Vo1．33，No．9 人 3型腺病毒 GZ13株的分离鉴定及六邻体 蛋 白的分子进化研究 张其威 ，赵素慧 ，王长兵 ，朱冰 ，朱利 ，赵卫 ，李凌 ，万成松 南‘方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系(广州 510515)；广东省广州市妇女儿童医疗 中心 中心 实验室(510120) 【摘要】 目的 分离鉴定1株引起儿童急性支气管肺炎的腺病毒及分析其主要中和抗原六邻体蛋白的分子 进化趋势。方法 采用荧光定量PCR方法，对 1例 引起严重支气管肺炎的惠儿咽拭子进行检测，并从 中分离得到 l株腺病毒 (命名为GZ13)。利用型特异性 引物 PCR进行初步亚型鉴定；克隆该株腺病毒完整的六邻体蛋白基 因，测序和序列比对，确定其型别；同时与GenBank上人3型腺病毒的六邻体蛋 白进行同源性比对，分析预测六邻 体蛋白的分子进化趋势。结果 该临床标本经荧光定量PCR鉴定为腺病毒强阳性，型特异性引物PCR初步鉴定 为3型；完整六邻体基 因比对最终确定为人3型腺病毒；GZ13株与我们先前分离的GZ0l、GZ02株及 台湾地 区分 离株核苷酸及氨基酸的同源性均大于99％。结论 引起该例儿童急性支气管肺炎的病原体为人3型腺病毒，目 前在广州以及台湾地区流行的3型腺病毒仍属同一流行株，其主要 中和性抗原六邻体蛋 白未出现明显变异，这对 今后开发研究人3型腺病毒疫苗及药物具有重要指导意义。 【关键词】 人3型腺病毒；六邻体蛋白；分子进化 Isolationand identificationofhuman adenovirustype3 GZ13strainandthemolecularevolution ofhexonpro- tein． ZHANGQi—wei ，ZHAOSu—hui，WANGChang—bing，ZHUBing，ZHULi，ZHAOWei，L1Ling，WAN Cheng—song． DepartmentofMicrobiology，SchoolofPublicHealthandTropicalMedicine，SouthernMedicalUniversity， Guangzhou510515，China Correspondingauthor：WANCheng—song ．E—mail：gzwcs@fimmu．corn A【bstract】 Objective Toisolateandidentifythehumanadenovirus(HAdV)fromachildwithanacutebron— chopneumonia，andtoanalyzethemolecularevolutionoftheneutralizingantigenhexonprotein．Methods Theadenovi— rus，namedGZ13，wasisolatedfromthethroatswabofachildwithsevereacutebronchopneumoniabyFQ—PCR．Type— specificprimerswereusedtoprimaryidentificationofvirustypebyPCR．Thecompletehexongenewasclonedandse- quencedforconfirmation．ThehexonproteinwasalsocomparedwiththeotherHAdV ～3topredictitsmolecularevolu— tion．Results TheadenovirusspecimenwasconfirmedbyFQ—PCR，andclassifiedasHAdV一3byprimaryPCRtyp— ing，whichwasfurtherconfirmedwithhexongeneblast．Therewas99％ homogeneityofnucleotideandaminoacid be— tweentheGZ13strainandGZ01．GZ02orTaiwanstrainaccordingtoalignmentwithallhexonproteinsofadenovirustype 3．Conclusion HAdV 一3isassociatedwiththisacutebronchopneumonia．Theprevalenttype3adenoviurses，GZ13， TaiwanStra