B超在测定不同方法消毒的骨形成蛋白成骨诱导活性中的意义.doc

　　B超在测定不同方法消毒的骨形成蛋白成骨诱导活性中的意义 摘 要:目的 探讨B超在测定骨形成蛋白（bone morpho-geic protein，BMP）成骨诱导活性的意义，为BMP成骨诱导活性的测定提供一种新方法. 方法 将自行提取的牛BMP（bBMP）分别经环氧乙烷熏蒸消毒和10000Gyγ-射线照射消毒后埋入小鼠右、左后腿肌袋内，于术后3，5，7，14，21和28d行B超、X射线照相和组织形态学观察. 结果 B超3，5和7d与对照组相同，均为正常组织回声，14，21和28d有软骨和骨组织回声，在此时间段内随时间延长回声增强.X射线照相3，5，7和14d无骨组织影像，21，28d有明显的新生骨征象.组织形态学观察3，5，7d有大量间充质细胞在BMP植入部位聚集，并诱导间充质细胞分化为成软骨细胞，14d有新生软骨和新生骨组织形成，21，28d可见大量的新生的成熟骨组织.环氧乙烷熏蒸和10000Gyγ-射线照射消毒的bBMP均有很强的成骨诱导活性. 结论 B超、X射线照相和组织形态学观察结果在时间上有很强的一致性，证明B超作为一种新的BMP成骨诱导活性的检测手段是切实可行的.γ-射线照射消毒BMP更方便、更安全. 　　Keyorphogeic proteins;osteogenesis;vl-trasonogrophy 　　Abstract:AIM In order to investigate the significance of B-mode ultrasound for determination of bone induction activity of bone morphogenitic protein（BMP）and to search for a neethod to determinate the activity.METHODS Self-pre-pared bovine bone morphogeic protein（bBMP）sterilized by enthlene oxide andγ-ray e uscles of the behind right and left leg of the mouse re-spectively.The place -ined ode ultrasound，X-ray and histologically at3，5，7，14，21and28days after the operation respectively.RESULTS No neode ultrasound and X-ray at3，5，7，14days and the neber of mesenchymal cells uscles in al bone s that there inative results of B-mode ultrasound，X-ray and histo-logical section e.So it seems feasible that B-mode ultrasound is regarded as a neethod to deter-mine the bone induction ability of bBMP.It is safer and more convenient for bBMP sterilized byγ-ray. 　　0 引言 　　国内已有多家单位掌握了骨形成蛋白（bone morphogeic protein，BMP）的提取技术，这使BMP的广泛研究和应用成为可能.但是BMP提取工序繁杂，生产条件限制颇多，所得到的BMP不是每批次都有成骨诱导活性，故供研究或应用前均须行生物学活性测定.目前常用的测定方法是X射线照相和组织形态学观察.我们根据B型超声的工作原理，试行将其引入到BMP成骨诱导活性的测定，得到了令人满意的结果，从而为BMP的研究和应用提供了一种新的活性测定方法，丰富了其检测手段. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 取健康雄性小鼠24只（第四军医大学动物中心提供），体质量25～30g. 　　1.2 方法 　　1.2.1 bBMP的提取与消毒保存 按金岩等［1］ 介绍的改良Urist等［2］ 方法，取新鲜牛四肢长骨的皮质骨，粉碎成直径1mm的骨颗粒，依次经1 1甲醇/氯仿、0.6mol L-1 盐酸、2mol L-1 氯化钙、0.5mol L -1 乙二胺四乙酸二钠、8mol L-1 氯化锂、6mol L-1 尿素+0.5mol L-1 氯化钙+10mmol N-乙基马来酰亚胺透析、离心，4mol L-1 盐酸胍+0.05mol L-1 氯化钙、0.25mol L-1 柠檬酸