壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基化作用的影响.doc

　　壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基化作用的影响 ：沈力， 闫 石， 吴祁生， 吴士良 【摘要】 目的： 观察中药壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基转移酶表达的影响,探讨中药多糖在肿瘤预防和 治疗 的应用。方法： 以浓度为50,100和200 mg/L的壳聚糖分别作用于肝癌细胞株SMMC7721和肺癌细胞株A549,采用RTPCR方法检测多肽：N乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAcT2）和β3GalT7的表达水平。 结果： 肝癌细胞株中ppGalNAcT2和β3GalT7仅微弱表达,加药后作用不明显；肺癌细胞株中ppGalNAcT2和β3GalT7均有所表达，加入不同浓度的壳聚糖之后，ppGalNAcT2和β3GalT7的表达均受到抑制，且随着壳聚糖浓度的增加，抑制作用越明显。结论： 肝癌细胞株SMMC7721和肺癌细胞株A549 ppGalNAcT2和β3GalT7的表达不同，壳聚糖能够抑制肺癌细胞株A549中的糖基转移酶ppGalNAcT2和β3GalT7的表达，从而抑制了糖基化作用，对肺癌的预防和治疗具有一定的价值。 【关键词】 壳聚糖； 肝癌； 肺癌； 糖基转移酶 ［Abstract］ Objective: To observe the effect of chitosan to the expression of different glycosyltransferases in liver cancer cell line and lung cancer cell line and to study the application of chitosan in preservation and treatment of tumor. Methods： Detect the expression of ppGalNAcT2 and β3GalT7 in SMMC7721 cell line and A549 cell line by RTPCR after chitosan added to the culture medium.The concentration of chitosan g/L. Results： The mRNA expression of ppGalNAcT2 and β3GalT7 RNA expression of ppGalNAcT2 and β3GalT7 in A549 cell line edium.As the increased of concentration, the inhibition ent of lung tumor. ［Key m孔径的滤膜过滤除菌,4℃放置备用。 SMMC7721和A549用含10％小牛血清的RPMI1640培养基，置37℃，5％CO2培养箱内培养，生长至对数生长期时进行细胞分组。细胞分成4组，第1组，即对照组，加入1 ml的培养基；第2组，加入等体积50 mg/L的壳聚糖；第3组，加入等体积的100 mg/L的壳聚糖；第4组，加入等体积的200 mg/L的壳聚糖。然后加入相同体积的培养基继续培养24 h。 1.3 RTPCR RTPCR法检测SMMC7721和A549细胞中ppGalNAcT2，β3GalT7的表达：将培养瓶中的细胞用PBS洗2次, 1 500 r/min离心5 min后弃上清,保留细胞,Trizol法提取总RNA。取总RNA 2 μg进行逆转录反应,再进行PCR扩增。扩增产物以2%的琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,图像分析仪摄像并分析结果。PCR反应体系(50 μl),反应条件： 94℃预变性3 min；循环：94℃变性45 s, 56℃复性1 min, 72℃延伸1 min,循环数30；72℃延伸7 min。引物设计采用Geyx软件,并经GenBank Blast进行同源检索后合成。引物由上海Invitrogen公司合成： βactin引物为：F：5′CTCGTGCTACTCTCTCTTTC3′，R：5′CATGTCTCGATCCCACTTAAC3′，预期扩增产物长度为211 bp。 ppGalNAcT2 引物为：F：5′GAAAGAATTAGGAAGGGTCAGAAC3′，R：5′CTGTGTCAATGTAAACATAGCTC3′，预期扩增产物长度为668 bp。 β3GalT7引物为：F：5′ TATGTGCCCGAGTCCTTCTTCG3′，R：5′ GCAGTTGTTTCCAGAGCCGAATG3′，预期扩增产物长度为303 bp。 2.2 不同浓度壳聚糖对肺癌细胞株A549 ppGalNAcT2和β3GalT7表达的影响 肺癌A549细胞株中p