强力霉素抑制丝裂霉素诱导的MTEC1细胞凋亡及其蛋白质组初步分析.doc

　　强力霉素抑制丝裂霉素诱导的MTEC1细胞凋亡及其蛋白质组初步分析 ：申卫红， 刘慧， 彭鑫， 肖雪媛， 何大澄 陈慰峰， 邵启祥 【摘要】 目的： 探讨强力霉素（doxycycline，Dox）保护胸腺上皮细胞的作用及其机制，为进一步研究Dox的免疫调节作用奠定基础。方法： 利用光学显微镜观察Dox对丝裂霉素(mitomycin, MMC)诱导MTEC1凋亡的影响，同时采用Hochest33342、PI单染、Annexin V和PI双染确认其作用，最后利用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术分析了SAX2芯片捕获的Dox作用前后的差异蛋白质。结果： 通过形态学观察、Hochest33342、PI单染及Annexin V和PI双染发现Dox确实能保护MTEC1抵抗丝裂霉素诱导的细胞凋亡。随后采用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术分析SAX2芯片捕获蛋白，发现Dox能调控15种蛋白，其中上调8种，下调7种。结论： Dox具有保护MTEC1，抑制MMC诱导的细胞凋亡作用，并对MTEC1的蛋白表达有调控作用。 【关键词】 强力霉素; 小鼠胸腺髓质上皮细胞系; 细胞凋亡； 蛋白质芯片 ［Abstract］ Objective: To expose the molecular mechanism of doxycycline(Dox) that protects the mouse thymic epithelial cell line(MTEC1) free from apoptosis itomycin(MMC).Methods： The effect of Dox protects the MTEC1 cells antiapoptosis against the MMC induced icroscope, and confirmed by Hochest33342 stain, PI single stain, Annexin V and PI double stain, and observed by fluorescence microscope or floeter. Furthermore, SELDI Protein Chip ics of MTEC1 cell cell apoptosis not only morphology observed icroscope but also detected by Hochest33342 stain, PI single stain, Annexin V and PI double stain. Proteomics assay by surfaceenhanced laser desorption/ionization timeofflight mass spectrometry(SELDITOFMS) disclosed that the Dox can upregulate 8 proteins expressions and doitomycin and regulated the proteins expressions in MTEC1. It echanisms of Dox on MTEC1. ［Key ouse thymic epithelial cell line; apoptosis； protein chip 强力霉素（doxycycline，Dox）是属于半合成的四环素类抗生素，除具有广谱抗菌作用外，还具有抗原虫、螺旋体、衣原体、支原体和立克次体等作用。近年来的研究表明Dox和其他四环素类抗生素还有其他生物学作用，如①抗肿瘤作用：Dox和四环素化学修饰物（chemically modified tetracyclines，CMTs） 通过上调caspase3途径［1］、Fas/FasL途径［2］及p53依赖途径［3］，抑制VEGF［4］、细胞外基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinases2，MMP2）,MMP9及VM［5，6］，通过线粒体依赖途径诱导细胞凋亡［1］，从而杀伤多种肿瘤和抑制肿瘤细胞（前列腺癌、血液系统肿瘤、淋巴瘤、乳腺癌及其骨转移瘤和骨肉瘤等）的转移；②抗凋亡作用：Dox和米诺霉素（minocycline，Min）可以通过抑制caspase 3，COX2，p38 MAPK和iNOS的表达，在脑缺血发生时保护脑细胞免于凋亡［7-9］；③抗炎症作用：Dox和CMTs下调单核细胞表面的MHCⅡ抗原表达，抑制软骨细胞、角膜上皮细胞表达炎症介质（IL1，IL6， TNFα和iNOS），抑制IL1转换酶β （IL1 betaconverting enzyme