第49课时 植物组织培养技术及DNA与蛋白质技术.pptVIP

第49课时 植物的组织培养技术及 DNA和蛋白质技术 考点一 植物的组织培养 1.实验操作流程 （1）配制培养基：加琼脂 溶化加蔗糖、各种 母液→调pH→分装。常用的植物组织培养基为MS 培养基，培养基配制好后要进行高压蒸汽灭菌。;（2）外植体消毒：外植体通常先用体积分数为70%的酒精消毒，再用质量分数为0.1%的氯化汞溶液消毒，最后无菌水清洗。 （3）接种：要在超净工作台上并且要在酒精灯火焰 附近操作。 （4）培养。 （5）移栽。 （6）栽培。;2.菊花茎的组织培养和月季的花药培养比较 （1）相同点 ①理论基础：植物细胞的全能性。 ②基本过程：脱分化→再分化→试管苗。 ③影响因素：营养、激素、pH、温度、光照等。 （2）不同点; ①材料的选取：菊花的组织培养实验中，应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝，该部分不仅分生???力强，而且无病毒侵染。月季花药的培养实验中，应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花药进行培养，且在花蕾期，因为此时质地幼嫩，花瓣未开，微生物不易侵入，容易消毒。;②剥离花药时，尽量不要损伤花药，同时还要彻底 去除花丝，防止对实验产生干扰。 ③外植体消毒：所用消毒剂为体积分数为70%的酒精 和质量分数为0.1%的氯化汞溶液，所使用的清洗液 是无菌水。 ④培养过程：在初期，菊花的组织培养需光照，月 季的花药培养不需光照，而在后期均需光照。;3.影响植物组织培养的因素 （1）材料：植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。一般来说，容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化。 （2）营养：常用的培养基是MS培养基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是 Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni、I、Co，有机 物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。 （3）激素：在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。;激素使用的先后顺序及其用量比例对细胞分裂和分 化的影响如下表：;（4）环境条件：pH、温度、光等环境条件。如菊花 组培所需pH为5.8，温度为18~22℃，光照条件为每 日用日光灯照射12小时。;对位训练 1.植物细胞表现出全能性的必要条件是 （ ） A.导入其他植物细胞的基因 B.将成熟筛管的细胞核移植到去核的卵细胞内 C.用适当浓度的秋水仙素处理 D.脱离母体后，给予适宜的营养和外界条件;2.影响植物组织培养的因素包括 （ ） ①培养基的配制 ②外植体的选取 ③激素的应 用 ④消毒⑤温度、pH、光照 A.①②③④⑤ B.①②③ C.①②③④ D.①②③⑤;考点二 DNA的粗提取与鉴定 1.原理、方法和目的;DNA不被蛋 白酶所水解;2.实验材料 （1）动物 （2）植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。 人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核, 也没有DNA，不适于作DNA提取的材料，但却是 提取血红蛋白的理想材料。;3.实验步骤及注意事项 （1）步骤：提取血细胞核物质（蒸馏水涨破）→ 溶解（2 mol/L的NaCl）→过滤（除杂质）→析出 （滴蒸馏水，降NaCl浓度至0.14 mol/L）→过滤→ 再溶解（2 mol/L的NaCl）→过滤→进一步提纯 （体积分数为95%的冷却酒精）→鉴定。;（2）鉴定;（3）注意事项 ①制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬 酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要的血细胞。 ②两次加蒸馏水的目的不同。 ③鉴定DNA时需沸水浴加热。;对位训练 3.相对于细菌分离，而DNA分子的分离和提取操作 要复杂的多。 （1）在DNA提取中两次用到蒸馏水，其目的分别是 。 （2）实验中能否以哺乳动物成熟的红细胞为实验材 料？为什么？ 。;考点三 PCR扩增技术与体内DNA复制 1.PCR的反应过程 （1）变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA 解旋为单链，如下图： （2）复性：温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图：;（3）延伸：温度上升到72℃左右，溶液中的四种 脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补 配对原则合成新的DNA链，如下图：;2.PCR扩增技术和DNA复制的比较;对位训练 4.标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大 步，这三大步需要的温度依次是 （ ） A.92℃、